Ensaio de formação de colônias de ágar mole: um método para testar os efeitos de novos compostos na proliferação de células cancerígenas

Resumo

Fonte: Horibata A. et. al., Utilização do ensaio de formação de colônias de ágar mole para identificar inibidores da tumorigenicidade em células de câncer de mama. J. Vis. Exp. (2015).

Este vídeo descreve um ensaio de formação de colônias de ágar mole para testar os efeitos de um inibidor da enzima PADI e BB-Cl-amidina na tumorigenicidade do câncer de mama in vitro. Este ensaio também permite a avaliação quantitativa do potencial de transformação celular no contexto de perturbações genéticas.

Protocolo

1. Preparação de 2-hidroxietil agarose a 3%

1. Em um frasco de vidro limpo e seco de 100 ml, adicione 0,9 g de 2-hidroxietilagarose (Agarose VII) seguido de 30 ml de água destilada.
2. Microondas a mistura por 15 segundos e agite suavemente. Repita esta etapa pelo menos mais três vezes até que o pó de agarose se dissolva completamente.
3. Autoclave o frasco contendo solução por 15 min.
4. Deixe a solução de agarose esfriar até RT antes de usá-la novamente. Armazene a solução no RT.

2. Preparação da camada inferior: 0,6% de gel de agarose

1. Pré-aqueça várias pipetas de 5 ml e 10 ml em uma incuba....

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Zeiss Axiopot	Microscopia Carl Zeiss	1021859251
Microscópio invertido	Olimpo	CKX41
DMEM/F-12	Lonza BioWhittaker	12-719F
HyClone Doador Equino Serum	Fisher Científico	SH30074.03
Penicilina estreptomicina	Tecnologias da Vida	15140-122
2-Hidroxietilagarose: Tipo VII, baixa temperatura de gelificação	Sigma-Aldrich	Rolamento 39346-81-1