Cultura tridimensional de células de carcinoma de pulmão: um método para estudar as interações célula-matriz

Resumo

Fonte: Chen, S. et. al. Sistema de cocultura multidimensional para modelar a progressão do carcinoma escamoso de pulmão. J. Vis. Exp. (2020).

Este vídeo descreve a técnica de cultura 3-D de células de carcinoma de pulmão para estudar as interações célula-matriz. No protocolo, realizaremos a cultura 3D de células de carcinoma de pulmão TUM622 para explorar seu potencial de formação de organoides in vitro.

Protocolo

1. Passagem e cultura de células TUM622 em culturas 2D

1. Meio de cultura 3D quente e reagentes de dissociação celular (ver Tabela de Materiais) para células TUM622 a 37 °C.
2. Células TUM622 de passagem a 80% de confluência em frascos 2D. Normalmente, isso ocorre 1 semana após a morte.
3. Descarte o meio antigo de um frasco T75 e lave uma vez com 6 mL de tampão HEPES. Evite pipetar diretamente nas células.
4. Aspire o tampão HEPES. Adicione 4 mL de tripsina / EDTA (0,25 mg / mL, consulte a Tabela de Materiais) para um enxágue rápido e descarte a tripsina / EDTA.
5. Adicione 2 mL de tripsina / EDTA....

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Meio de crescimento epitelial brônquico	Lonza	CC-3170 BEGM
Filtro de células 40um	ThermoFisher	Rolamento 352340	Para passar células TUM622
CoolRack CFT30	Biocisão	BCS-138	Para cultura 3D
CoolSink XT96F	Biocisão	BCS-536	Para cultura 3D
Kit de coleta de células 3D Cultrex	Bio-Techne	3448-020-K
Matrigel (preferido para monocultura)	Corning	356231	Para cultura 3D
Sistema de lamínula alemão com câmara Lab-Tec II #1.5	Nalge Nunc Internacional	155409 (8)	Para cultura 3D
Sistema de lamínula alemão com câmara Lab-Tec II #1.5	Nalge Nunc Internacional	155379 (2)	Para cultura 3D
Reagentes de subcultura ReagentPack	Lonza	CC-5034	Para dissociação celular TUM622