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Artigo de método

Microdissecção a laser: uma técnica para isolar células invasoras de câncer colorretal a partir de um modelo de cultura organotípica 3D

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⸱

30 de abril de 2023

Neste artigo

Resumo

Fonte: Bullock M. et al., Perfil molecular do microambiente tumoral invasivo em um modelo tridimensional de células cancerígenas colorretais e fibroblastos ex vivo. (2014).

O vídeo descreve a dissecção a laser do modelo de cocultura organotípica 3D com precisão em nível de mícron. Em modelos organotípicos 3D, constituintes estromais, como fibroblastos, são co-cultivados tridimensionalmente com células epiteliais cancerígenas. O modelo 3D serve como uma ferramenta experimental que permite que as interações entre invasão e estroma de câncer sejam estudadas em condições quase fisiológicas.

Protocolo

1. Preparação organotípica:

Preparação do gel organotípico impregnado com fibroblastos:

  1. Preparar uma suspensão de células de fibroblastos contendo 5 x 105 células por organotípico em DMEM suplementada com 10% de FCS e 292 μg/ml de L-Glutamina.
  2. Completar os géis organotípicos em gelo nas seguintes proporções:
    • • 7 volumes de Rat-Tail Collagen: Mistura de Matrigel (1:1)
    • • 1 volume de DMEM 10x filtrado
    • • 1 volume de FCS
    • • 1 volume de suspensão de células de fibroblastos contendo 5 x 105 fibroblastos
      Para 9 géis (1 ml por gel), prepar....

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Divulgações

Não há conflitos de interesse declarados.

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
Linhas celulares de câncer colorretal - exemplo mostrado SW480ATCCATCC CCL-228
colagénioBD Biociências354265
MatrigelBD Biociências354234
Membrana de nylonMerck MilliporeVVLP01300
Grade metálicaA empresa de malhaWSS20-A4themeshcompany.com
Plataforma de microdissecção a laserLeica MicrosystemsLeica AS LMD
Lâminas montadas em membranaDispositivos moleculares
Violeta CresylMerck Millipore1052350025

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