Transüretral İndüksiyon Fare İdrar Yolu Enfeksiyonu
Summary
Bu video transüretral fare idrar yolu enfeksiyonlarına neden ve enfeksiyonların sonucunda dereceye ölçmek için yöntemler gösterecektir.
Abstract
Ilgi üropatojenik bakteri suşlarının agar yetiştirilmektedir. Genellikle, üropatojenik<em> E. coli</em> (UPEC) ve diğer suşların 37 gece Luria-Bertani agar (LB) yetiştirilebilir ° C, havadaki. UPEC suşları LB agar sarımsı-beyaz saydam koloniler olarak büyür. Uygun koloni morfolojisi onayı takiben, tek koloniler, daha sonra suyu olarak yetiştirilebilir toplanır. LB suyu en üropatojenik bakteri suşları için kullanılabilir. İki seri, bir gecede LB suyu kültürleri, tip I pili, üropatojenik bakteriler için iyi tanımlanmış bir virülans faktörü ifade artırmak için istihdam edilebilirler. Broth kültürler istenen konsantrasyona fosfat tamponlu salin (PBS) seyreltilir. Sekiz-12 haftalık dişi farelerde izofluran anestezi altında yerleştirilir ve transüretral 30 göstergesi şırınga boru kaplı polietilen kullanılarak bakteri inoküle. Ampirik / fare her bakteri suşu kombinasyonu için tespit edilmelidir tipik inocula, 10<sup> 6</sup> 10<sup> 8</sup> 10 ila 50 mikrolitre PBS kob başına fare. İstenen enfeksiyon döneminden sonra (birkaç hafta gün), idrar örnekleri ve mesane ve her ikisi de böbrek hasat edilir. Her organ, kıyılmış PBS içinde yer ve Mavi Bullet Homojenizatör homojenize. Idrar ve doku homojenatlarında seri PBS içinde seyreltilmesi ve uygun bir agar kültüre. Ertesi gün, koloni oluşturan birim sayılır.
Protocol
Discussion
İndüksiyon fare idrar yolu enfeksiyonu, bakteri transüretral aşılama köklü ama teknik olarak zor bir işlemdir 11. Hung ve Hultgren fare idrar yolu enfeksiyonu 13 transüretral teknikler son zamanlarda mükemmel bir inceleme yayınladı. Bu çalışmada, biz bu deneysel yaklaşım daha ince göstermek için çalışırlar.
Yeni başlayanlar, mesane ortaya çıkarmak için bir orta hat laparotomi yapmak, Hindistan mürekkep (PBS içinde% 1) bir çözelti enjekte v…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Yazarlar, uzman teknik yardım için Shelly Xie ve Jennifer Payne, kabul etmek istiyorum. Bu çalışma Pediatrik Üroloji Derneği ve Stanford Pediatrik Araştırma Fonu hibe yoluyla mümkün olmuştur.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Cryovial tubes, 2.0 ml polypropylene (no caps) | E&K Scientific | 640201 | ||
| Caps for cryovial tubes, with ‘O’ ring | E&K Scientific | 440011-N | ||
| Bullet Blender | Next Advance | BBX24 | ||
| Zirconium Oxide Beads (0.5mm) | Next Advance | ZROB05 | ||
| Stainless Steel Beads (1.6mm) | Next Advance | SSB16 | ||
| Stainless Steel Bead Blend (0.9-2.0mm) | Next Advance | SSB14B | ||
| CBA/J Mice, 8-12 week old female | Jackson Laboratories | 000656 | ||
| Phosphate Buffered Saline (NaCl 137mM, KCl 2.7mM, Na2HPO4 4.3mM, KH2PO4 1.4mM) | EMD | EM-SX0420-13 (NaCl) EM-PX1405-1 (KCl) EM1.06585.0 (Na2HPO4) EM-5108-1 (KH2PO4) | ||
| LB agar | ||||
| LB broth | EMD | 1.10285.0500 | ||
| Isoflurane (Aerrane) | Baxter | NDC 10019-773-60 | ||
| Inoculating loops | Fisher Scientific | 22-363-601 | ||
| Eosin-methylene blue (EMB) agar powder | Himedia Laboratories | MM022-500G | ||
| MacConkey agar powder | Difco | 212123 | ||
| LB agar powder | Difco | 244520 | ||
| Intramedic non-radiopaque polyethylene tubing, PE10 [inner dimension 0.28 mm (0.011 inch); outer dimension 0.61 mm (0.024 inch)] | BD Biosciences | 427401 | ||
| 30 gauge needles, 1/2 inch | BD Biosciences | 305106 | ||
| 1 ml tuberculin Slip-Tip syringe | BD Biosciences | 309602 | ||
| 3 ml Luer-Lock syringe | BD Biosciences | 309585 |
Referências
- Schaeffer, A. J., Schwan, W. R., Hultgren, S. J., Duncan, J. L. Relationship of type 1 pilus expression in Escherichia coli to ascending urinary tract infections in mice. Infect Immun. 55, 373-380 (1987).
- Rouschop, K. M. Urothelial CD44 facilitates Escherichia coli infection of the murine urinary tract. J Immunol. 177, 7225-7232 (2006).
- Malaviya, R., Ikeda, T., Abraham, S. N. Contribution of mast cells to bacterial clearance and their proliferation during experimental cystitis induced by type 1 fimbriated E. coli. Immunol LettM. 91, 103-111 (2004).
- Lane, M. C., Alteri, C. J., Smith, S. N., Mobley, H. L. Expression of flagella is coincident with uropathogenic Escherichia coli ascension to the upper urinary tract. Proc Natl Acad Sci U S A. 104, 16669-16674 (2007).
- Hvidberg, H. Development of a long-term ascending urinary tract infection mouse model for antibiotic treatment studies. Antimicrob Agents Chemother. 44, 156-163 (2000).
- Hopkins, W. J., Hall, J. A., Conway, B. P., Uehling, D. T. Induction of urinary tract infection by intraurethral inoculation with Escherichia coli: refining the murine model. J Infect Dis. 171, 462-465 (1995).
- Hopkins, W. J., Gendron-Fitzpatrick, A., Balish, E., Uehling, D. T. Time course and host responses to Escherichia coli urinary tract infection in genetically distinct mouse strains. Infect Immun. 66, 2798-2802 (1998).
- Gunther, N. W. t., Lockatell, V., Johnson, D. E., Mobley, H. L. In vivo dynamics of type 1 fimbria regulation in uropathogenic Escherichia coli during experimental urinary tract infection. Infect Immun. 69, 2838-2846 (2001).
- Bishop, B. L. Cyclic AMP-regulated exocytosis of Escherichia coli from infected bladder epithelial cells. Nat Med. 13, 625-630 (2007).
- Thumbikat, P., Waltenbaugh, C., Schaeffer, A. J., Klumpp, D. J. Antigen-specific responses accelerate bacterial clearance in the bladder. J Immunol. 176, 3080-3086 (2006).
- Hagberg, L. Ascending, unobstructed urinary tract infection in mice caused by pyelonephritogenic Escherichia coli of human origin. Infect Immun. 40, 273-283 (1983).
- Hopkins, W. J., Hall, J. A., Conway, B. P., Uehling, D. T. Induction of urinary tract infection by intraurethral inoculation with Escherichia coli: refining the murine model. J Infect Dis. 171, 462-465 (1995).
- Hung, C. S., Dodson, K. W., Hultgren, S. J. A murine model of urinary tract infection. Nat Protoc. 4, 1230-1243 (2009).
