Целью данного документа является указание читателя в работе интегрированной атомно-силовой микроскоп-оптических изображений для механической стимуляции живых клеток в культуре. Шаг за шагом протокол представлен. Набор репрезентативных данных показывает жить клеточного ответа на механическое раздражение представлена.
Чтобы понять механизм, посредством которого живые клетки смысле механических сил, и как они реагируют и приспосабливаются к окружающей среде, новые технологии способны исследовать клетки поведения на субклеточном уровне с высоким пространственным и временным разрешением был разработан. Таким образом, атомно-силового микроскопа (АСМ) была интегрирована с полным внутренним отражением флуоресценции (TIRF) микроскопии и быстро вращающийся диск (ФУР) конфокальной микроскопии. Интегрированная система широко применяется в широком диапазоне молекулярных динамических исследований в любой сторонник живых клеток, что позволяет прямых оптических изображений клеточного ответа на механическое раздражение в режиме реального времени. Значительные перестройки актиновых филаментов и координационные спайки было показано из-за местных механических раздражений на апикальной поверхности клеток, что индуцированные изменения в клеточной структуре всей клетке тела. Эти инновационные технологии, будет предоставлять новую информацию для понимания живых клеток и реструктуризации динамика в ответ на механическую силу. Подробный протокол, а также представитель набор данных, которые показывают, жить клеточного ответа на механическое раздражение представлены.
7-10 цитоскелета и фокальных спайки 11-16 динамические структуры, которые собираются, разойтись и перевернуться, как клетки мигрируют или ответить на механическую силу 17. Они имеют важные функции в регуляции клеточного роста, выживания и экспрессии генов. Зная их специфи?…
The authors have nothing to disclose.
Винкулин-GFP плазмида подарок от Кеннета Ямада, Национальные институты здравоохранения, Национального института стоматологических и черепно-лицевых исследований, Bethesda, штат Мэриленд, и актин-mRFP плазмиду подарок от Майкла Дэвидсона, Университет штата Флорида, Таллахасси, штат Флорида.
Эта работа была поддержана NSF Карьера награду # 0747334 и AHA-Национальный SDG # 0835205N к Андреа трахеи.
Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
AFM tip | Novascan Technologies | 2 micron Borosilicate bead, 0.01N/m, Biotin Surface | ||
avidin | Sigma Aldrich | A9275 | 1mg/mL in DPBS | |
Fibronectin | Sigma Aldrich | F4759 | 1 mg/mL | |
DPBS | Invitrogen | 21600-051 | ||
Amaxa transfection kit for Smooth Muscle Cells | Lonza | VPI-1004 | ||
Mattek glass bottom dishes | MatTek Corporation | P60G-1.5-30-F | Sterile 60mm Falcon dishes with glass bottom coverslip no. 1.5 |