लाइव सेल यांत्रिक उत्तेजना उत्तर एकीकृत ऑप्टिकल और परमाणु शक्ति माइक्रोस्कोपी द्वारा पढ़ाई
Summary
इस कागज संस्कृति में जीवित कोशिकाओं के यांत्रिक उत्तेजना के लिए एक एकीकृत परमाणु के आपरेशन में पाठक बल ऑप्टिकल इमेजिंग खुर्दबीन हिदायत करना है. एक कदम-by-कदम प्रोटोकॉल प्रस्तुत किया है. एक प्रतिनिधि डेटा सेट है कि रहते सेल यांत्रिक उत्तेजना के जवाब से पता चलता है प्रस्तुत किया है.
Abstract
व्यवस्था है जिसके द्वारा जीवित कोशिकाओं यांत्रिक बलों भावना को समझते हैं, और वे जवाब कैसे और अपने पर्यावरण के लिए अनुकूल, एक नई उप सेलुलर स्तर पर उच्च स्थानिक और लौकिक संकल्प के साथ कोशिकाओं के व्यवहार की जांच करने में सक्षम प्रौद्योगिकी विकसित किया गया था. इस प्रकार, एक परमाणु बल सूक्ष्मदर्शी (AFM) कुल आंतरिक प्रतिबिंब प्रतिदीप्ति (TIRF) माइक्रोस्कोपी और तेजी से कताई डिस्क (FSD) confocal माइक्रोस्कोपी के साथ एकीकृत किया गया था. एकीकृत प्रणाली मोटे तौर पर किसी भी पक्षपाती जीवित कोशिकाओं में आणविक गतिशील अध्ययन के एक व्यापक रेंज भर में लागू है, वास्तविक समय में यांत्रिक उत्तेजना को सेल प्रतिक्रियाओं का प्रत्यक्ष ऑप्टिकल इमेजिंग की अनुमति. Actin filaments और फोकल adhesions की अहम पुनर्व्यवस्था शिखर कोशिका की सतह पर स्थानीय यांत्रिक उत्तेजना है कि सेल शरीर भर में सेलुलर संरचना में परिवर्तन प्रेरित करने के लिए कारण दिखाया गया था. इन नवीन तकनीकों यांत्रिक बल के जवाब में रहते सेल पुनर्गठन और गतिशीलता को समझने के लिए नई जानकारी प्रदान करेगा. एक विस्तृत प्रोटोकॉल और एक प्रतिनिधि डेटा सेट है कि शो के रहते सेल यांत्रिक उत्तेजना के जवाब प्रस्तुत कर रहे हैं.
Protocol
Discussion
Cytoskeleton 7-10 और फोकल adhesions 11-16 गतिशील संरचनाओं कि इकट्ठा, फैलाने और पर बारी के रूप में कक्षों की ओर पलायन या यांत्रिक बल के करने के लिए 17 जवाब हैं. वे सेल के विकास, अस्तित्व, और जीन अभिव्यक्ति के विनियम?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
प्लाज्मिड Vinculin – GFP केनेथ यामादा, राष्ट्रीय स्वास्थ्य संस्थान, दंत चिकित्सा और craniofacial रिसर्च राष्ट्रीय संस्थान, बेथेस्डा, मेरीलैंड, और actin-mRFP प्लाज्मिड से एक उपहार था माइकल डेविडसन, फ्लोरिडा स्टेट यूनिवर्सिटी, Tallahassee, फ्लोरिडा से एक उपहार था.
यह काम NSF कैरियर पुरस्कार 0747334 # और अहा राष्ट्रीय # 0835205N SDG Andreea Trache द्वारा समर्थित किया गया था.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| AFM tip | Novascan Technologies | 2 micron Borosilicate bead, 0.01N/m, Biotin Surface | ||
| avidin | Sigma Aldrich | A9275 | 1mg/mL in DPBS | |
| Fibronectin | Sigma Aldrich | F4759 | 1 mg/mL | |
| DPBS | Invitrogen | 21600-051 | ||
| Amaxa transfection kit for Smooth Muscle Cells | Lonza | VPI-1004 | ||
| Mattek glass bottom dishes | MatTek Corporation | P60G-1.5-30-F | Sterile 60mm Falcon dishes with glass bottom coverslip no. 1.5 |
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