Den Organotypic hippocampus Slice Kultur Modell för prövningen Neuronal skada
Summary
Den organoptypic hippocampus bit kultur-modellen är en<em> In vitro</em> Modell som används för att undersöka neuronala skador i olika paradigm. I denna artikel beskriver vi de metoder för att generera slice kulturer och kvantifiera neuronal skada.
Abstract
Organotypic hippocampus bit kultur är ett in vitro-metod för att undersöka mekanismer för neuronal skada där den grundläggande strukturen och sammansättningen av hippocampus är relativt bevarade 1. Det organotypic kulturen systemet tillåter för undersökning av neuronala, astrocytic och microglial effekter, utan som en ex vivo-förberedelser, inte tar upp effekterna av blodflöde, eller rekrytering av perifera inflammatoriska celler. I detta syfte är denna kultur metod som ofta används för att undersöka excitotoxic och hypoxiska skador pyramidformade nervceller i hippocampus, men har också använts för att undersöka det inflammatoriska svaret. Häri beskriver vi de metoder för att generera hippocampus skiva kulturer från födseln gnagare hjärnan, administrera giftiga stimuli för att framkalla neuronala skador, och testmetoder och kvantifiering av hippocampus neuronal död.
Protocol
Discussion
Det finns två viktiga punkter att följa för att säkerställa reproducerbara och konsekventa resultat vid replikering experiment. Först är det viktigt att låta hippocampus skivor ålder för 12-14 dagar innan försöket. Med bit isolering, det finns en betydande microglial svar och mikroglia förblir aktiverad under en tid, med en återgång till ett vilande förgrenad tillstånd som förekommer vid dag 10 in vitro 3,6. För det andra menar PI fluorescensintensiteten är proportionell mot antal…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Finansieras av NINDS, American Heart Association, American Federation for Aging Research, March of Dimes
Referências
- Stoppin, L., Buchs, P. A., Muller, D. A simple method for organotypic cultures of nervous tissue. J Neurosci Methods. 37 (2), 173-173 (1991).
- McCullough, L., Wu, L., Haughey, N. Neuroprotective Function of the PGE2 EP2 Receptor in Cerebral Ischemia. J Neurosci. 24 (1), 257-257 (2004).
- Czapiga, M., Colton, C. A. Function of microglia in organotypic slice cultures. J Neurosci Res. 56, 644-644 (1999).
- Newell, D. W., Barth, A., Papermaster, V. Glutamate and non-glutamate receptor mediated toxicity caused by oxygen and glucose deprivation in organotypic hippocampal cultures. J Neurosci. 15, 7702-7702 (1995).
- Wu, L., Wang, Q., Liang, X. Divergent Effects of prostaglandin recetor signaling on neuronal survival. Neuroscience letter. 421, 253-253 (2007).
- Hailer, N. P., Jarhult, J. D., Nitsch, R., R, . Resting microglial cells in vitro: Analysis of morphology and adhesion molecule expression in organotypic hippocampal slice cultures. Glia. 18, 319-319 (1996).
