साबुत माउंट में भ्रूण तंत्रिका तंत्र के विज़ुअलाइज़ेशन ड्रोसोफिला भ्रूण
Summary
हम मंचन तैयार करने की प्रक्रिया का वर्णन<em> ड्रोसोफिला</em> भ्रूण embryogenesis दौरान भ्रूण तंत्रिका तंत्र के दृश्य के लिए.
Abstract
ड्रोसोफिला भ्रूण neuronal विकास के सेलुलर और आणविक आधार जांच के लिए एक आकर्षक मॉडल प्रणाली है. यहाँ हम ड्रोसोफिला भ्रूण तंत्रिका neuronal प्रोटीन के लिए एंटीबॉडी का उपयोग प्रणाली के दृश्य के लिए प्रक्रिया का वर्णन . चूंकि पूरे भ्रूण परिधीय तंत्रिका और केंद्रीय तंत्रिका प्रणाली अच्छी तरह से व्यक्ति की कोशिकाओं के स्तर (; Bodmer एट अल, 1987;. Dambly – Chaudière एट अल, 1986 Bodmer एट अल, 1989) में विशेषता है, इन प्रणालियों के लिए किसी भी aberrations सकता आसानी से विभिन्न neuronal प्रोटीन के लिए एंटीबॉडी का उपयोग पहचान की. विकासशील भ्रूण निश्चित समय पर एकत्रित कर रहे हैं करने के लिए सुनिश्चित करें कि भ्रूण के दृश्य के लिए उचित विकास के चरणों में हैं. संग्रह के बाद भ्रूण की बाहरी परत, chorion झिल्ली और vitelline लिफाफा है कि भ्रूण के चारों ओर, निर्धारण से पहले हटा रहे हैं. भ्रूण तो neuronal एंटीबॉडी के साथ incubated हैं और fluorescently लेबल माध्यमिक एंटीबॉडी का उपयोग करते हुए कल्पना. चरणों में भ्रूण 12-17 भ्रूण तंत्रिका तंत्र का उपयोग करने के लिए कल्पना कर रहे हैं. सीएनएस 12 अवस्था में रोगाणु बैंड छोटा शुरू होता है और 15 मंच द्वारा commissure की निश्चित पैटर्न हासिल किया गया है. 17 चरण तक सीएनएस अनुबंध और पीएन को पूरी तरह (Campos Ortega एट अल 1985) विकसित की है. इस प्रकार पीएन और CNS के पैटर्न में बदलाव को आसानी से इन विकास के चरणों के दौरान देखा जा सकता है है.
Protocol
Discussion
ड्रोसोफिला भ्रूण neuronal विकास के दौरान सेलुलर और आणविक परिवर्तन की जांच के लिए एक शक्तिशाली प्रणाली है. इस प्रोटोकॉल में हम कैसे immunohistochemistry के लिए पूरे माउंट भ्रूण तैयार करने के लिए प्रदर्शन किया है. हम क?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
एसजी से भैंस पर न्यूयॉर्क के राज्य विश्वविद्यालय और जॉन आर Oishei फाउंडेशन से धन के द्वारा समर्थित है.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| 37% formaldehyde | Fisher | BP531-25 | ||
| CSP | Developmental Studies Hybridoma Bank | |||
| HRP-FITC | Jackson ImmunoResearch Laboratories | 323-095-021 | ||
| Alexa Fluor 568 Goat Anti-Mouse IgG | Invitrogen | A-11004 | ||
| Vectashield Mounting Medium | Vector Laboratories, Inc. | H-1000 |
Referências
- Bodmer, R., Barbel, S., Sheperd, S., Jack, J. W., Jan, L. Y., Jan, Y. N. Transformation of sensory organs by mutations of the cut locus of D. melanogaster. Cell. 51, 293-307 (1987).
- Bodmer, R., Carretto, R., Jan, Y. N. Neurogenesis of the peripheral nervous system in Drosophila embryos: DNA replication patterns and cell lineages. Neuron. 3, 21-32 (1989).
- Campos-Ortega, J. A., Hartenstein, V. . The Embryonic Development of Drosophila melanogaster. , (1985).
- Carroll, S. B., Scott, M. P. Localization of the fushi tarazu protein during Drosophila embryogenesis. Cell. 43, 47-57 (1985).
- Dambly-Chaudière, C., Ghysen, A., Jan, Y. N., Jan, L. Y. Muscle connections between imaginal discs in Drosophila. Biologia do Desenvolvimento. 113, 288-294 (1986).
