ホールマウントの胎児神経系の可視化ショウジョウバエ胚
Summary
我々は段階的な準備をする手順を説明<em>ショウジョウバエ</em胚発生中の胚の神経系の視覚化のための>胚。
Abstract
ショウジョウバエの胚では神経発達の細胞および分子的基礎を調査するための魅力的なモデルシステムです。ここでは、ニューロンタンパク質に対する抗体を用いてショウジョウバエ胚神経系の視覚化のための手順を説明します。全体の胚性末梢神経および中枢神経系は、個々の細胞のレベル（。。; Bodmer ら、1987;。Dambly -オタワら 、1986 Bodmer ら 、1989）で特徴づけられるので、これらのシステムへの異常できます簡単に別のニューロンタンパク質に対する抗体を使用して識別される。胚は、胚が可視化するための適切な発達段階にあることを確認するために特定の時間に収集されます。収集した後、胚の外側の層、絨毛膜と胚を囲む卵黄のエンベロープは、固定前に削除されます。胚はその後、神経細胞の抗体とインキュベートし、蛍光標識二次抗体を用いて可視化されています。段階での胚は、12月17日胚の神経系へのアクセスを可視化されています。ステージ12で、中枢神経系胚帯は短縮を開始し、段階15で交連の決定的なパターンを実現しています。ステージ17によってCNS契約とPNSは、完全に（カンポス-オルテガら 1985）開発されています。したがって、PNSやCNSのパターンの変化は容易にこれらの発達段階で観察することができます。
Protocol
Discussion
ショウジョウバエの胚では神経細胞の開発中に、細胞と分子の変化を調査するための強力なシステムです。このプロトコルでは、免疫組織化学のために全体のマウント胚を準備する方法を示している。私たちは、キャロルとスコット、1985年に記述されたプロトコルからこのプロトコルを適応している。このプロトコルはまた、他の神経細胞の抗体をテストするために適応させること?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
SGは、ニューヨーク州立大学バッファロー校からとJohn R. Oishei財団からの資金によってサポートされています。
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| 37% formaldehyde | Fisher | BP531-25 | ||
| CSP | Developmental Studies Hybridoma Bank | |||
| HRP-FITC | Jackson ImmunoResearch Laboratories | 323-095-021 | ||
| Alexa Fluor 568 Goat Anti-Mouse IgG | Invitrogen | A-11004 | ||
| Vectashield Mounting Medium | Vector Laboratories, Inc. | H-1000 |
Referências
- Bodmer, R., Barbel, S., Sheperd, S., Jack, J. W., Jan, L. Y., Jan, Y. N. Transformation of sensory organs by mutations of the cut locus of D. melanogaster. Cell. 51, 293-307 (1987).
- Bodmer, R., Carretto, R., Jan, Y. N. Neurogenesis of the peripheral nervous system in Drosophila embryos: DNA replication patterns and cell lineages. Neuron. 3, 21-32 (1989).
- Campos-Ortega, J. A., Hartenstein, V. . The Embryonic Development of Drosophila melanogaster. , (1985).
- Carroll, S. B., Scott, M. P. Localization of the fushi tarazu protein during Drosophila embryogenesis. Cell. 43, 47-57 (1985).
- Dambly-Chaudière, C., Ghysen, A., Jan, Y. N., Jan, L. Y. Muscle connections between imaginal discs in Drosophila. Biologia do Desenvolvimento. 113, 288-294 (1986).
