Visualisering av embryonala nervsystemet i hela-fäste Drosophila Embryon

Summary

Vi beskriver förfarandet för att förbereda iscensatta<em> Drosophila</em> Embryon för visualisering av embryonala nervsystemet under fosterutvecklingen.

Abstract

Den Drosophila embryot är en attraktiv modell för att undersöka de cellulära och molekylära grunden för nervsystemets utveckling. Här beskriver vi proceduren för visualisering av Drosophila embryonala nervsystemet med hjälp av antikroppar mot neuronala proteiner. Eftersom hela embryonala perifera nervsystemet och centrala nervsystemet är väl karakteriserade i nivå med enskilda celler (Dambly-Chaudière et al, 1986;.. Bodmer et al, 1987;. Bodmer et al, 1989), alla avvikelser till dessa system kan lätt identifieras med hjälp av antikroppar mot olika neuronala proteiner. Utvecklingsländerna embryona samlas in vid vissa tidpunkter för att se till att embryona i rätt utvecklingsstadier för visualisering. Efter samlingen är de yttre lagren av embryot, det chorion membranet och vitelline som omger embryot, bort innan fixering. Embryon inkuberas därefter med neuronala antikroppar och visualiseras med hjälp av fluorescerande sekundära antikroppar. Embryon de led 12-17 visualiseras tillgång till embryonala nervsystemet. Vid stadium 12 i CNS grodden bandet börjar förkorta och steg 15 det slutgiltiga mönstret av commissure har uppnåtts. Genom att steg 17 i CNS kontrakt och PNS är fullt utvecklad (Campos-Ortega et al. 1985). Således kan förändringar i mönstret av PNS och CNS kan lätt observeras under dessa utvecklingsstadier.

Protocol

1. Beredning av reagenser Förbered PEMFA buffert med 100mm Rör, 2mm EGTA, och 1 mm MgSO 4. Justera pH i bufferten till 7,0. Den PEMFA bufferten är filtersteriliserad och lagras vid 4 ° C. Förbered PBT genom att tillsätta 1 ml Triton X-100 till 100 ml 1x PBS (fosfatbuffrad saltlösning) (pH 7,0). Förvaras vid 4 ° C. Bered 5% BSA (bovint serumalbumin) med 0,01% NaAcide i 1x PBS (pH 7,0). Förbered koksaltlösning med 0,7% NaCl och 0,03% Triton X-100 i avjon…

Discussion

Den Drosophila embryot är ett kraftfullt system för att utreda de cellulära och molekylära förändringar under nervsystemets utveckling. I detta protokoll har vi visat hur man förbereder hela montera embryon för immunohistokemi. Vi har anpassat detta protokoll från det protokoll som beskrivs i Carroll och Scott, 1985. Detta protokoll kan också anpassas för att testa andra neuronala antikroppar, men optimering av antikroppar bör göras. Dessutom kan utvecklingsmässiga defekter på embryonala PNS och …

Materials

Material Name	Tipo	Company	Catalogue Number	Comment
37% formaldehyde		Fisher	BP531-25
CSP		Developmental Studies Hybridoma Bank
HRP-FITC		Jackson ImmunoResearch Laboratories	323-095-021
Alexa Fluor 568 Goat Anti-Mouse IgG		Invitrogen	A-11004
Vectashield Mounting Medium		Vector Laboratories, Inc.	H-1000