Este artigo descreve os procedimentos experimentais usados para preparar os tendões da cauda de rato para estudos biomecânicos e mechanobiological. Várias características dos principais passos na preparação são demonstrados, começando com a extração, transversal medição da área, lavagem e carregamento na câmara biorreator.
Abstract
Tendões de ratos de cauda (RTTs) são um modelo comum biológicos utilizados em estudos experimentais in vitro nas áreas de fisiologia do tendão e tendinopatia. Trabalhando com esses tecidos é um desafio, porque eles são muito frágeis, e até agora não havia nenhum protocolo rigorosamente detalhadas para o seu isolamento.
Diante desses desafios, temos desenvolvido métodos e instrumentos para facilitar a manipulação de RTTs e tecido controle de viabilidade esterilidade e integridade. Este artigo descreve os procedimentos experimentais usados para preparar RTTs para estudos biomecânicos e mechanobiological. Nosso trabalho é dividido em quatro etapas principais: extração, transversal medição da área, lavagem e carregamento na câmara biorreator.
A cada passo, todos os procedimentos, materiais e manipulações são apresentados em detalhe, para que possam ser facilmente reproduzidos. Além disso, os instrumentos específicos desenvolvidos são apresentados: uma placa de manipulação usada para segregar RTTs, um micrômetro óptico para posicionar o tecido durante a medição da área transversal e um sistema de ancoragem para fixar a RTTs em um biorreator.
Por fim, descrevemos os resultados obtidos após vários testes para validar os nossos métodos. Avaliações a viabilidade de esterilidade e integridade demonstrar que os nossos procedimentos são suficientemente rigorosas para manipulações de tecidos frágeis, como os tendões da cauda de rato.
Protocol
Antes de qualquer manipulação, é preciso identificar o grupo de tendões para ser usado, dependendo da experiência que estão a realizar e os aparelhos à sua disposição. Para os nossos propósitos, tendões ventral foram escolhidos porque são menores e, portanto, mais fácil de manipular durante a medição da área transversal e equipando-os para dentro da câmara biorreator. Por favor note que todos os instrumentos são autoclavados ou esterilizados com álcool 70%. Além dis…
Discussion
Aplicando os procedimentos experimentais, podemos realizar uma grande variedade de estudos de vitro sobre este tipo de tecidos. Como por exemplo, um estudo sobre a degeneração do tecido foi realizada pela aplicação de sub-estimulação para RTTs por um período de 10 dias. Cada dia, nós avaliamos as propriedades mecânicas do tecido em ensaios não-destrutivos de relaxamento stress. No final, pudemos observar variação de tensão RTT e, portanto, analisar a evolução das propriedades mecânicas….
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Este artigo foi apoiada pelo Grant NSERC # 299280, IRSST como uma bolsa de estudos para G. Pais e FRSQ como um prêmio de graduação de estudantes de pesquisa para M. Cyr. Agradecemos a Yoan Lemieux-Laneville para realizar as manipulações gravadas em vídeo.
Dupuis, D. .Déshydratation de matrices collagéniques reconstruites in vitro: effets sur les propriétés mécaniques et histologiques [dissertation]. , 114-114 (1981).
Bruneau, A., Champagne, N., Cousineau-Pelletier, P., Parent, G., Langelier, E. Preparation of Rat Tail Tendons for Biomechanical and Mechanobiological Studies. J. Vis. Exp. (41), e2176, doi:10.3791/2176 (2010).