活体鼠脑微循环显微镜使用一个封闭的颅窗口
Summary
活体显微镜，按照时间和空间在软脑膜微循环血流动力学和炎症事件。
Abstract
这一实验模型的目的是评估在急性和慢性，生理和病理的血 流动力学，炎症和代谢的条件下小鼠软脑膜微循环 ，在体内荧光显微镜使用。左parieto枕的老鼠的大脑皮层放置在一个封闭的颅窗口。通过使用EPI和荧光照明，测量血管直径和红细胞（RBC）的执行速度的窗口局部微循环是实时记录。使用实时交叉相关性和/或荧光标记的红细胞，红细胞流速测量。白细胞和血小板粘附到软脑膜血管灌注和血管渗漏的评估与荧光标记的标记，如白蛋白- FITC和抗CD45 – TxR还抗体帮助。可以反复录像在几天微。我们用于第一次关闭窗口脑活体显微镜研究软脑膜微循环的动态变化，并跟随在安卡疟原虫感染小鼠当然，显示CM的表达与微循环功能障碍的特点是由血管收缩，减少血液中的深刻流，并最终血管崩溃。
Protocol
1。开颅手术需要提前1如前所述，除了一个钛棒是不是动物的头放在一个开颅手术在8到10周大的老鼠。慢性颅窗口是一个稳定的准备允许甚至几个月后，被植入的软脑膜微循环检查。通常情况下，我们执行2-3周后颅窗口植入我们的研究。 2。活体显微镜开颅手术后两三个星期，体温检查，然后鼠标轻轻麻醉与异氟醚（归纳为4％，维持1-2％）…
Discussion
这里描述的活体显微镜方法，提供了一个在小鼠软脑膜微循环的详细观察独特而强大的工具。它允许挑出个别动脉和静脉和测量的一些参数如血管直径，红细胞速度，血流量，坚持和白细胞，血小板和其他血液成分，血管渗漏，组织pH值及PO2滚动的变化和潜在的许多其他应用。 在体内的血管反应，可及时进行评估后，如药品监督管理局的干预，或在病理过程。此外，微循环的行为，可以动?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
这项工作是支持R01 – HL87290补助，R01 – HL87290 – S1和美国国立卫生研究院R01 – AI082610 LJMC。
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Isoflurane | Baxter | FDG9623 | ||
| Carbocyanine dye Dil | Molecular Probes | D306 | ||
| Albumin-FITC | Sigma-Aldrich | A9771 | ||
| Anti-CD45-TxR Ab | Invitrogen | MCD4517 | ||
| P. berghei ANKA-GFP | MR4 | MRA-865 |
Referências
- Mostany, R., Portera-Cailliau, C. A craniotomy surgery procedure for chronic brain imaging. J. Vis. Exp. (15), (2008).
- Intaglietta, M., Tompkins, W. R. Microvascular measurements by video image shearing and splitting. Microvasc. Res. 5, 309-312 (1973).
- Briceno, J. C., Cabrales, P., Tsai, A. G., Intaglietta, M. Radial displacement of red blood cells during hemodilution and the effect on arteriolar oxygen profile. Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 286, 1223-1228 (2004).
- Bishop, J. J., Nance, P. R., Popel, A. S., Intaglietta, M., Johnson, P. C. Relationship between erythrocyte aggregate size and flow rate in skeletal muscle venules. Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 286, H113-120 (2004).
- Baldwin, A. L. Modified hemoglobins produce venular interendothelial gaps and albumin leakage in the rat mesentery. Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 277, H650-H659 (1999).
- Cabrales, P., Zanini, G. M., Meays, D., Frangos, J. A., Carvalho, L. J. Murine cerebral malaria is associated with a vasospasm-like microcirculatory dysfunction, and survival upon rescue treatment is markedly increased by nimodipine. Am. J. Pathol. 176 (3), 1306-1315 (2010).
Tags
Intravital MicroscopyMouse BrainMicrocirculationClosed Cranial WindowAcute ConditionsChronic ConditionsPhysiological ConditionsPathophysiological ConditionsIn Vivo Fluorescence MicroscopyPial MicrocirculationReal-time RecordingEpi IlluminationFluorescence IlluminationVessel DiametersRed Blood Cell VelocitiesRBC Velocity MeasurementCross-correlationFluorescent-labeled ErythrocytesLeukocyte AdherencePlatelet AdherencePerfusion AssessmentVascular Leakage AssessmentFluorescence-labeled MarkersAlbumin-FITC MarkerAnti-CD45-TxR AntibodiesVideo RecordingPlasmodium Berghei ANKA InfectionMicrocirculatory Dysfunctions
Citar este artigo
Cabrales, P., Carvalho, L. J. M. Intravital Microscopy of the Mouse Brain Microcirculation using a Closed Cranial Window. J. Vis. Exp. (45), e2184, doi:10.3791/2184 (2010).