Summary

Microinjection الجنين بعوض ألف الحصول على البعوض المعدلة وراثيا

Published: July 04, 2007
doi:

Summary

في هذا الفيديو ، Nijole Jasinskiene يوضح المنهجية المستخدمة لتوليد البعوض المعدلة وراثيا الزاعجة المصرية ، والتي هي نواقل حمى الضنك. وأظهرت أساليب إعداد صحيح microinjection الإبر ، dessicating الأجنة ، وأداء microinjection.

Abstract

في هذا الفيديو ، Nijole Jasinskiene يوضح المنهجية المستخدمة لتوليد البعوض المعدلة وراثيا الزاعجة المصرية ، والتي هي نواقل حمى الضنك. وأظهرت أساليب إعداد صحيح microinjection الإبر ، dessicating الأجنة ، وأداء microinjection.

Protocol

إعداد مقدما من microinjection البعوض الدم : للحقن من الاثنين الى الجمعة من الإناث إطعام في يوم الخميس الماضي. تعد الإبر الزجاج باستخدام برنامج 3 أو 2 (انظر المواد). مد أنبو?…

Materials

Material Name Tipo Company Catalogue Number Comment
1x Injection solution Buffer     5mM KCl, 0.1mM sodium phosphate, ph 6. 8
Construct plasmid DNA     0.5 mg/ml.
Helper plasmid DNA     0.3 mg/ml
EndoFree Plasmid kit Kit Qiagen    
Millex-GV column     SLGV RO4 NL To clean DNA.
Glass puller Instrument Sutter Instrument Co Model P-87 Heat-815, Pull-10, Vel-10, Time-100. Heat-700, Pull-30, Vel-36, Time-50
Quartz puller Instrument Sutter Instrument Co Model P-2000 Heat-275, Fil-3, Vel-38, Del-250, Pull-141
Injection glass needles       Prepared by drawing capillary tubing into a fine 3-8 um with a shaft of approximately 100-300 um micropipette puller. When the needle is new, the tip is sealed and usually breaks in the first or second injection or the glass needle tip can be beveled using a Brown type micro-pipette beveller (Sutter Instrument).
Aedes aegypti Animal     Male and female mosquitos, to obtain embryos.
Drosophila culture vial       For mosquito egg-laying.
Halocarbon oil Reagent     Oil for desiccation: Halocarbon oil 700:Halocarbon oil 27(1:1)
Forceps No5 Tool      
Fine paintbrush   Sable No. 0000  
Whatman paper Tool      
Microloader Tool Eppendorf 5242 956.003  
Transjector Tool Eppendorf    
Microscope   Leica   With moving stage and micromanipulator.
3MM Whatman paper        
double sided tape        

Play Video

Citar este artigo
Jasinskiene, N., Juhn, J., James, A. A. Microinjection of A. aegypti Embryos to Obtain Transgenic Mosquitoes. J. Vis. Exp. (5), e219, doi:10.3791/219 (2007).

View Video