और वयस्क hippocampal आर्कटिक ग्राउंड गिलहरी तंत्रिका स्टेम सेल के विकास और भेदभाव
Summary
तंत्रिका स्टेम कोशिकाओं वयस्क गैर सुप्तावस्था एक बरस आर्कटिक जमीन गिलहरी (AGS) के हिप्पोकैम्पस से तैयार थे. इन तंत्रिका स्टेम सेल कई मार्ग के माध्यम से विस्तार किया जा सकता है है, भेदभाव और glial संस्कृति के लिए एक लगभग 50:50 न्यूरॉन के रूप में बनाए रखा.
Abstract
आर्कटिक जमीन गिलहरी (Urocitellus parryii, AGS) उनके पास या नीचे एक ठंड एक मुख्य शरीर के तापमान के साथ सीतनिद्रा में होना करने की क्षमता में अद्वितीय हैं. इन जानवरों को भी vivo 2,3 और ऑक्सीजन ग्लूकोज अभाव में 4,5 इन विट्रो में मस्तिष्क में इस्कीमिक चोट का विरोध . इन अद्वितीय गुण प्रोत्साहन प्रदान AGS के न्यूरॉन्स को अलग करने के लिए अंतर्निहित neuronal विशेषताओं है कि AGS के न्यूरॉन्स की क्षमता चोट और सेल ischemia के कारण मौत और बेहद ठंडे तापमान का विरोध करने के लिए खाते सकता है की जांच. पहचान प्रोटीन या जीन लक्ष्य है कि इन कोशिकाओं के विशिष्ट गुणों के लिए अनुमति देते हैं इस्कीमिक संकेत के एक नंबर के लिए और ठंडे सहिष्णुता के अध्ययन के लिए प्रभावी उपचार की खोज में सहायता कर सकते हैं. प्रौढ़ AGS हिप्पोकैम्पस तंत्रिका स्टेम कोशिकाओं है कि पैदा करना जारी रखने के होते हैं, इन स्टेम कोशिकाओं की संस्कृति में आसान विस्तार के लिए अनुमति देता है. हम यहाँ जिसके द्वारा शोधकर्ताओं प्रयोजनों के किसी भी संख्या के लिए इन स्टेम कोशिकाओं और विभेदित न्यूरॉन्स का उपयोग कर सकते हैं तरीकों का वर्णन. बारीकी से इन चरणों का पालन करके AGS तंत्रिका स्टेम सेल दो या अधिक मार्ग के माध्यम से विस्तार किया जा सकता है और फिर एक विभाजित कोशिकाओं की संख्या कम से कम जहरीले रसायनों का उपयोग करने के लिए बिना TUJ1 पॉजिटिव न्यूरॉन्स (~ 50%) में उच्च संस्कृति के लिए विभेदित. Ischemia neurogenesis के 6 और neurogenesis जो MEK / ERK और PI3K/Akt अस्तित्व संकेत रास्ते vivo में 7 और 8 इन विट्रो (Kelleher एंडरसन, आकर्षित एट अल. तैयारी में) में ischemia के प्रतिरोध के लिए योगदान देता है के माध्यम से आय लाती है. इसके अलावा इन अद्वितीय तंत्रिका कोशिकाओं के लक्षण वर्णन कई मोर्चों पर अग्रिम, कुछ या सभी इन तरीकों के उपयोग कर सकते हैं.
Protocol
Discussion
AGS वयस्क तंत्रिका स्टेम कोशिकाओं को मजबूत कर रहे हैं और कई मार्ग उन्हें बुनियादी तंत्रिका स्टेम सेल गुणों के अध्ययन के लिए एक तंत्रिका स्टेम कोशिकाओं के उत्कृष्ट स्रोत बनाने के लिए विस्तारित किया जा स…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
यह काम अमेरिकी सेना चिकित्सा अनुसंधान और materiel कमान # अनुदान 05178001 और स्नायविक विकारों और स्ट्रोक के राष्ट्रीय संस्थान से NS041069-06 द्वारा समर्थित किया गया. हम प्रोटोकॉल पर उपयोगी टिप्पणी के लिए योएल Vonnahme धन्यवाद.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| agsNSC | Lifeline | FC-0004 | ||
| agsNSC Expansion kit | Lifeline | LL-0008 | Alternative source for DMEM/F12, B27 and rhFGFb (www.invitrogen.com) | |
| agsNSC differentiation kit | Lifeline | LL-0009 | Alternative source for DMEM/F12 and ITS-x (www.invitrogen.com) | |
| NeuraLife maintenance media kit | Lifeline | LL-0012 | Alternative sources are NeuraBasal (LifeLine) or Neurobasal (in vitrogen), glutamine and B27 (www.invitrogen.com)Differentiated cells are maintained for up to 3 weeks in NeuroLife, but no more than 2 weeks in Neurobasal (www.invitrogen.com) | |
| Micrometer (such as a Bright Line Counting Chamber) | Hausser Scientific | 1490 | http://www.hausserscientific.com/hausserbrightlinedirect.htm | |
| Biocoat Poly-L-Lysine coated 96 well plates | BDBioscience | 356516 | www.bdbiosciences.com | |
| Large orifice pipette tips | Fisher Scientific | 02-707-141 | Avoids neuronal cell damage when pippetting. http://www.fishersci.com |
Referências
- Barnes, B. M. Freeze avoidance in a mammal: body temperatures below 0 degree C in an Arctic hibernator. Science. 244, 1593-1595 (1989).
- Dave, K. R., Prado, R., Raval, A. P., Drew, K. L., Perez-Pinzon, M. A. The Arctic ground squirrel brain is resistant to injury from cardiac arrest during euthermia. Stroke. 37, 1261-1265 (2006).
- Dave, K. R. Protein kinase C epsilon activation delays neuronal depolarization during cardiac arrest in the euthermic arctic ground squirrel. J Neurochem. 110, 1170-1179 (2009).
- Ross, A. P., Christian, S. L., Zhao, H. W., Drew, K. L. Persistent tolerance to oxygen and nutrient deprivation and N-methyl-D-aspartate in cultured hippocampal slices from hibernating Arctic ground squirrel. J Cereb Blood Flow Metab. 26, 1148-1156 (2006).
- Christian, S. L. Arctic ground squirrel (Spermophilus parryii) hippocampal neurons tolerate prolonged oxygen-glucose deprivation and maintain baseline ERK1/2 and JNK activation despite drastic ATP loss. J Cereb Blood Flow Metab. 28, 1307-1319 (2008).
- Jin, K. Evidence for stroke-induced neurogenesis in the human brain. Proc Natl Acad Sci U S A. 103, 13198-13202 (2006).
- Maysami, S., Lan, J. Q., Minami, M., Simon, R. P. Proliferating progenitor cells: a required cellular element for induction of ischemic tolerance in the brain. J Cereb Blood Flow Metab. 28, 1104-1113 (2008).
- Sung, S. M. Hypoxia/reoxygenation stimulates proliferation through PKC-dependent activation of ERK and Akt in mouse neural progenitor cells. Neurochem Res. 32, 1932-1939 (2007).
- Brewer, G. J. Isolation and culture of adult rat hippocampal neurons. J Neurosci Methods. 71, 143-155 (1997).
- Palmer, T. D., Takahashi, J., Gage, F. H. The adult rat hippocampus contains primordial neural stem cells. Mol Cell Neurosci. 8, 389-404 (1997).
