我们提供一份详细的协议,准备原代细胞脱离<em> Drosophil</em>一个胚胎。能够进行有效的RNAi扰动,与其他分子生物学,生物化学和细胞成像方法,将允许各种问题加以解决,<em>果蝇</em>原代细胞。
在这里,我们描述了一个准备从果蝇原肠期胚胎和培养原代细胞分离的方法。总之,大量上演来自年轻和健康的苍蝇的胚胎收集,消毒,然后身体成单细胞悬浮液,使用玻璃匀浆分离。镀合适的密度,在培养基中培养板或玻片上后,这些细胞可以进一步分化成几种形态不同的细胞类型,可以通过其特定的细胞标记鉴定。此外,我们目前的治疗与双链(DS)的RNA这些细胞,引起基因敲除的条件。在果蝇中的主要细胞的高效RNAi是通过简单地沐浴在培养基中含有双链RNA的细胞。开展有效的RNAi的扰动,与其他分子生物学,生物化学,细胞成像分析的能力,将允许在果蝇的主要细胞,尤其是那些涉及到分化的肌肉和神经细胞的回答各种各样的问题。
果蝇细胞的原代培养的发展模式可以相差很大,可能是由于在主细胞制备过程中的几个变量。首先,苍蝇产卵应该是年轻的(在一个星期内老)和健康(无病毒或细菌感染)。未受精或受感染的胚胎必须避免,因为他们是无用的,从这些胚胎来源的细胞不能区分,将只能存活1-2天。其次,在同质化过程中,重要的是不超载太多的胚胎匀浆。匀浆超载太多的胚胎,会导致碎片和死细胞,最终…
The authors have nothing to disclose.
巴顿得到了达蒙Runyon癌症研究基金会奖学金DRG – 1716 – 02。锦州是支持由美国国立卫生研究院/ NIGMS奖学金F32 GM082174 – 02。 NP是霍华德休斯医学研究所研究员。