Dissecção da Oenocytes de Adultos Drosophila melanogaster</em
Summary
Em insetos, o oenocytes produzir compostos de hidrocarbonetos cuticulares. Estes compostos protegem contra a dessecação e facilitar a comunicação química. Aqui nós demonstramos uma técnica de dissecção usado para isolar o oenocytes de adultos<em> Drosophila melanogaster</em>, E ilustram como esta preparação pode ser utilizada para estudar os genes envolvidos na síntese de hidrocarbonetos.
Abstract
Em<em> Drosophila melanogaster</em>, Como em outros insetos, uma camada de cera na superfície externa da cutícula, composta principalmente de compostos de hidrocarbonetos, oferece proteção contra a dessecação e outros desafios ambientais. Vários compostos destes hidrocarbonetos cuticulares (CHC) também funcionam como sinais semiochemical, e como tal mediar comunicações pheromonal entre os membros da mesma espécie, ou em alguns casos, entre espécies diferentes, e influenciam o comportamento. Células especializadas referido como oenocytes são considerados como o principal local para a síntese de CHC. No entanto, pouco se sabe sobre o envolvimento do oenocytes na regulação da biossíntese, transporte e vias de deposição de contribuir para a saída de CHC. Dado o papel significativo que CSCs jogar em vários aspectos da biologia de insetos, incluindo a comunicação química, resistência à dessecação, e imunidade, é importante para obter uma maior compreensão da regulação molecular e genética da produção CHC dentro dessas células especializadas. O oenocytes adultos de<em> D. melanogaster</em> Estão localizados dentro do tegumento abdominal, e são metamerically vestida de fita-como grupos irradiando ao longo da superfície interna cuticular de cada segmento abdominal. Neste artigo vídeo que demonstrar uma técnica de dissecção utilizado para a preparação de oenocytes de adultos<em> D. melanogaster</em>. Especificamente, nós fornecemos uma demonstração passo a passo detalhado de (1) como filé de preparar um adulto<em> Drosophila</em> Abdômen, (2) como identificar as oenocytes e discerni-los de outros tecidos, e (3) como remover intacta aglomerados oenocyte do tegumento abdominal. Uma breve ilustração experimental de como esta preparação pode ser usado para examinar a expressão de genes envolvidos na síntese de hidrocarboneto é incluído. A preparação dissecados demonstrado aqui irá permitir a análise detalhada molecular e genética da função oenocyte na mosca da fruta adulto.
Protocol
Discussion
Neste artigo de vídeo apresenta um protocolo de dissecação detalhada para a preparação do oenocytes do adulto D. melanogaster de forma adequada para a análise molecular. Um texto baseado em abreviado em conta o método de dissecação tem sido descrito em outros lugares 2, ea preparação resultando oenocyte demonstrou ser adequado para a extração de RNA e proteínas 2. Usando essa preparação também pode ser possível desenvolver métodos para a cultura de oenocytes explantado. …
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Gostaríamos de agradecer Amsale Belay por sua ajuda nas filmagens deste artigo vídeo. Este trabalho foi financiado pela CIHR, NSERC e subvenções para CRC JDL.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Sylgard | Dow Corning | |||
| Tungsten Wire | Ted Pella, Inc. | 27-11 | 0.005”/20’ | |
| Forceps | Dumont | 11252-30 | #5 | |
| Shields and Sang M3 Insect Medium | Sigma | S3652 | ||
| RNeasy Micro Kit | Qiagen | 74004 | ||
| qScript cDNA Synthesis Kit | Quanta Biosciences | 95047-100 | ||
| Monoject Hypodermic Needle | Harvard Apparatus | 722289 | 20G1 with aluminum hub |
Referências
- Wielowiejski, H. Ueber das blutgewebe der insekten. Zeit. Wiss. Zool. 43, 512-536 .
- Krupp, J. J., Kent, C., Billeter, J. C., Azanchi, R., So, A. K., Schonfeld, J. A., Smith, B. P., Lucas, C., Levine, J. D. Social experience modifies pheromone expression and mating behavior in male Drosophila melanogaster. Curr. Biol. 18, 1373-1383 (2008).
- Locke, M. Surface membranes, Golgi complexes, and vacuolar systems. Annu. Rev. Entomol. 48, 1-27 (2003).
- Billeter, J. C., Atallah, J., Krupp, J. J., Millar, J. G., Levine, J. D. Specialized cells tag sexual and species identity in Drosophila melanogaster. Nature. 461, 987-991 (2009).
- Gould, A. P., Elstob, P. R., Brodu, V. Insect oenocytes: a model system for studying cell-fate specification by Hox genes. J. Anat. 199, 25-33 (2001).
- Lawrence, P. A., Johnston, P. Cell lineage of the Drosophila abdomen: the epidermis, oenocytes and ventral muscles. J. Embryol. Exp. Morphol. 72, 197-208 (1982).
- Johnson, M. B., Butterworth, F. M. Maturation and aging of adult fat body and oenocytes in Drosophila as revealed by light microscopic morphometry. J. Morphol. 184, 51-59 (1985).
- Gutierrez, E., Wiggins, D., Fielding, B., Gould, A. P. Specialized hepatocyte-like cells regulate Drosophila lipid metabolism. Nature. 445, 275-280 (2007).
- Marcillac, F., Bousquet, F., Alabouvette, J., Savarit, F., Ferveur, J. F. A mutation with major effects on Drosophila melanogaster sex pheromones. Genética. 171, 1617-1628 (2005).
- Chertemps, T., Duportets, L., Labeur, C., Ueyama, M., Wicker-Thomas, C. A female-specific desaturase gene responsible for diene hydrocarbon biosynthesis and courtship behaviour in Drosophila melanogaster. Insect Mol. Biol. 15, 465-473 (2006).
- Legendre, A., Miao, X. X., Da Lage, J. L., Wicker-Thomas, C. Evolution of a desaturase involved in female pheromonal cuticular hydrocarbon biosynthesis and courtship behavior in Drosophila. Insect. Biochem. Mol. Biol. 38, 244-255 (2008).
- Shirangi, T. R., Dufour, H. D., Williams, T. M., Carroll, S. B. Rapid evolution of sex pheromone-producing enzyme expression in Drosophila. PLoS Biol. 7, e1000168-e1000168 (2009).
