प्रयोगात्मक अभिव्यक्ती के लिए स्तनधारी CNS में ऑप्टिक तंत्रिका transection के बाद के तरीके
Summary
ऑप्टिक तंत्रिका transection वयस्क सीएनएस चोट के एक मॉडल व्यापक रूप से इस्तेमाल किया है. इस मॉडल प्रयोगात्मक अभिव्यक्ती है कि रेटिना विश्व स्तर पर लक्ष्य या सीधे रेटिना नाड़ीग्रन्थि कोशिकाओं के घायल neuronal जनसंख्या लक्ष्य के एक नंबर प्रदर्शन करने के लिए आदर्श है.
Abstract
रेटिना नाड़ीग्रन्थि कोशिकाओं (RGCs) सीएनएस न्यूरॉन्स रहे हैं कि उत्पादन रेटिना से मस्तिष्क के लिए ऑप्टिक तंत्रिका के माध्यम से दृश्य, सूचना. ऑप्टिक तंत्रिका आँख की कक्षा के भीतर पहुँचा जा सकता है और पूरी तरह से (axotomized) transected पूरे RGC जनसंख्या के axons काटने है. ऑप्टिक तंत्रिका transection वयस्क 1-4 सीएनएस में एक प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य apoptotic neuronal सेल मौत का मॉडल है. यह मॉडल विशेष रूप से आकर्षक है क्योंकि आँख के शीशे चैम्बर दवा रेटिना को प्रसव के लिए एक कैप्सूल के रूप में कार्य करता है, intraocular इंजेक्शन के माध्यम से प्रयोगात्मक अभिव्यक्ती की अनुमति है. कांच तरल पदार्थ के माध्यम से रसायनों के प्रसार सुनिश्चित करता है कि वे संपूर्ण RGC जनसंख्या पर कार्रवाई. वायरल वैक्टर, plasmids या कम दखल RNAs (siRNAs) भी शीशे चैम्बर के लिए दिया जा सकता है क्रम में रेटिना की कोशिकाओं को संक्रमित या transfect 5-12. एडिनो – एसोसिएटेड वायरस वैक्टर (AAV) के उच्च tropism लक्ष्य RGCs के लिए फायदेमंद है, एक संक्रमण दर इंजेक्शन साइट 6, 7, 13-15 के पास की कोशिकाओं के 90% आ के साथ, है. इसके अलावा, RGCs चुनिंदा 16-19 ऑप्टिक तंत्रिका या इंजेक्शन वैक्टर की कटौती अंत तक अपने लक्ष्य बेहतर 10 colliculus में siRNAs, plasmids, या वायरल vectors लागू करने के द्वारा ट्रांसफ़ेक्ट किया जा सकता है. यह शोधकर्ताओं अन्य दर्शक न्यूरॉन्स या आसपास glia पर confounding प्रभाव के बिना घायल neuronal आबादी में apoptotic तंत्र का अध्ययन करने के लिए अनुमति देता है. RGC apoptosis को एक बार पाठ्यक्रम विशेषता है जिससे कोशिका मृत्यु 3-4 दिनों postaxotomy, जिसके बाद कोशिकाओं के तेजी से पतित देरी हो रही है. यह प्रयोगात्मक apoptosis में शामिल रास्ते के खिलाफ निर्देशित जोड़तोड़ के लिए एक खिड़की प्रदान करता है. जोड़तोड़ कि सीधे transected ऑप्टिक तंत्रिका स्टंप से RGCs लक्ष्य axotomy के समय में प्रदर्शन कर रहे हैं, तंत्रिका काटने के तुरंत बाद. इसके विपरीत, जब पदार्थ एक intraocular मार्ग के माध्यम से वितरित कर रहे हैं, वे सर्जरी से पहले या सर्जरी के बाद पहले 3 दिनों के भीतर इंजेक्शन जा सकता है, axotomized RGCs में apoptosis की दीक्षा पूर्ववर्ती. वर्तमान अनुच्छेद में, हम ऑप्टिक तंत्रिका transection के बाद प्रयोगात्मक जोड़तोड़ के लिए कई तरीकों का प्रदर्शन.
Protocol
Discussion
ऑप्टिक तंत्रिका transection वयस्क सीएनएस न्यूरॉन apoptosis की एक अत्यधिक प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य मॉडल है. इस पांडुलिपि में प्रदर्शन प्रयोगात्मक जोड़तोड़ चोट के बाद RGC apoptosis के तंत्र के अध्ययन की अनुमति.
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The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
पी डी CIHR ऑपरेटिंग अनुदान (86,523 एमओपी) द्वारा समर्थित है
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Stereotaxic Frame | Stoelting, Kopf, WPI | |||
| Rat Gas Mask | Stoelting, Kopf, WPI | |||
| Anesthesia System | VetEquip | 901806 | ||
| Isoflurane (PrAErrane) | Baxter Corp | DIN 02225875 | ||
| Surgical Microscope | WPI, Zeiss, Leica | |||
| Alcaine Eye Drops | Alcon | |||
| Tears Naturale P.M. | Alcon | |||
| Fine tip Dumont forceps | Fine Science Tools | 11252-00 | ||
| 10 μl Hamilton Syringe (1701RN; 26s/2”/2) | Hamilton Syringe Co. | 80030 | ||
| 1/16 inch Compression Fittings | Hamilton Syringe Co. | 55751-01 | ||
| 1/16 inch OD, 0.010 inch ID, PEEK Tubing | Supelco, Bellefonte, PA | Z226661 | ||
| Dual RN Glass Coupler | Hamilton Syringe Co. | 55752-01 | ||
| Mineral Oil Priming Kit: includes syringe, needles, rubber septa | Hamilton Syringe Co. | PRMKIT |
Referências
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