पैच और आयन चैनल के अध्ययन के लिए दबाना छिड़काव तकनीक में व्यक्त Xenopus Oocytes
Summary
बीके चैनलों की ईओण वर्तमान पैच दबाना तकनीक का उपयोग कर दर्ज की गई है. बीके चैनलों में व्यक्त कर रहे हैं<em> Xenopus oocytes</em> दूत शाही सेना इंजेक्शन लगाने के द्वारा. पैच दबाना रिकॉर्डिंग के दौरान intracellular समाधान छिड़काव प्रणाली द्वारा नियंत्रित किया जाता है.
Abstract
यहाँ प्रस्तुत प्रोटोकॉल बड़े प्रवाहकत्त्व, वोल्टेज और 2 Ca + K सक्रिय + चैनलों (बी) के सक्रियण का अध्ययन करने के लिए डिज़ाइन किया गया है. प्रोटोकॉल भी अन्य आयन चैनलों और neurotransmitter एक रिसेप्टर्स के लिए रिश्ता संरचना समारोह का अध्ययन करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. बीके चैनलों व्यापक रूप से विभिन्न ऊतकों में व्यक्त कर रहे हैं और चिकनी मांसपेशी संकुचन के विनियमन, भीतरी बालों की कोशिकाओं की आवृत्ति ट्यूनिंग और neurotransmitter रिहाई 2-6 के नियमन सहित कई शारीरिक कार्यों में फंसाया गया है है. बीके चैनलों झिल्ली विध्रुवण और intracellular Ca 2 + मिलीग्राम और 2 6-9 + द्वारा सक्रिय कर रहे हैं. इसलिए, प्रोटोकॉल दोनों झिल्ली वोल्टेज और intracellular समाधान को नियंत्रित करने के लिए डिज़ाइन किया गया है. इस प्रोटोकॉल में, बीके चैनलों के दूत शाही सेना Xenopus laevis oocytes (चरण वी छठी) 18 ° 10-13 सी पर 2-5 दिन ऊष्मायन द्वारा पीछा में अंतःक्षिप्त है. झिल्ली पैच कि एकल या एकाधिक चैनलों बीके होते अंदर बाहर विन्यास पैच दबाना 10-13 तकनीक का उपयोग के साथ excised हैं. पैच के intracellular ओर वांछित समाधान के साथ इतना है कि विभिन्न शर्तों के तहत चैनल सक्रियण जांच की जा सकती रिकॉर्डिंग के दौरान perfused है. संक्षेप में प्रस्तुत करने के लिए, बीके चैनलों के mRNA Xenopus laevis oocytes में इंजेक्शन oocyte झिल्ली पर चैनल प्रोटीन व्यक्त, पैच दबाना तकनीक नियंत्रित वोल्टेज और intracellular समाधान के तहत चैनलों के माध्यम से बहती धाराओं रिकॉर्ड के लिए उपयोग किया जाता है.
Protocol
Discussion
oocyte अभिव्यक्ति प्रणाली वोल्टेज पर निर्भर आयन अंतर्जात चैनलों की अपेक्षाकृत कम पृष्ठभूमि के कारण चैनलों के electrophysiological लक्षण वर्णन के लिए आदर्श है. इसके अलावा, के बाद से यह एक क्षणिक अभिव्यक्ति प्रणाली है, ?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
यह काम राष्ट्रीय स्वास्थ्य R01-HL70393 और JCJC R01-NS060706 अनुदान के संस्थान के द्वारा समर्थित किया गया स्पेन्सर टी. Olin बंदोबस्ती पर बायोमेडिकल इंजीनियरिंग के एक प्रोफेसर है.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Nanoject II Auto-Nanoliter Injector | Drummond Scientific Company | 3-000-204 | ||
| P-97 Flaming/Brown Micropipette Puller | Sutter Instruments | P-97 | ||
| Perfusion System and Electronic Controller | AutoMate Scientific, Inc. | ValveLink 16 | Inner diameter of perfusion tip: 100 microns | |
| Inverted Microscope | Olympus | CKX31 | ||
| Glass Pipettes | VWR International | 53432-921 | ||
| Flaming/Brown Micropipette Puller | Sutter Instrument Co. | P-97 | ||
| Amplifier | Axon Instruments | AXOPATCH 200B | ||
| Computer Interface | INSTRUTECH Corporation | ITC-18 | ||
| Headstage | Axon Instruments | CV 203BU |
Referências
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