Triagem de mutantes com defeitos fenotípicos é um método simples para identificar genes que funcionam em um determinado processo biológico. Neste artigo vamos descrever como worms cultura livre vivos (por exemplo, Pristionchus pacificus) No laboratório e mostrar dois métodos diferentes mutagênese, EMS e TMP UV /.
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Artigo de método
Uma Introdução ao Lab Worm: de Worms Cultivar a mutagênese
* These authors contributed equally
Neste artigo
Resumo
Resumo
Este protocolo descreve os procedimentos para manter a nematóides em laboratório e como induz mutações los usando dois métodos alternativos: o metano sulfonato de etila (EMS) e 4, 5, 8-trimethylpsoralen combinada com luz ultravioleta (TMP / UV). Nematóides são poderosos sistemas biológicos para estudos genéticos por causa de seu plano corporal simples e sistema de acasalamento, que é composto de auto-fertilização hermafroditas e homens que podem gerar centenas de descendentes por animal. Nematóides são mantidos em placas de ágar contendo um gramado de bactérias e podem ser facilmente transferidos de uma placa para outra usando uma picareta. EMS é um agente alquilante comumente usado para induzir mutações pontuais e pequenas deleções, enquanto TMP / UV induz principalmente exclusões. Dependendo da espécie de nematóide sendo usado, as concentrações de EMS e TMP terá que ser otimizado. Para isolar mutações recessivas do nematóide pacificus Pristionchus, os animais da geração F2 foram selecionados para fenótipos visualmente. Para ilustrar esses métodos, mutagenizados worms e olhou para a falta de coordenação (Unc), Dumpy (DPY) e Transformer (Tra) mutantes.
Protocolo
Parte 1: Preparando o crescimento da mídia nematóide (NGM) placas de Petri
Nematóides experimentais como C. elegans e P. pacificus são normalmente cultivadas em laboratório em 6 placas de Petri contendo meio centímetro Nematóides do Crescimento (NGM) 1. Worms são mantidos a 20 ° C, mas pode ser incubado a uma gama de temperaturas (entre 4 ° C - 25 ° C), dependendo da espécie de nematóides e design experimental. Para preparar pratos com NGM, standard técnicas estéreis devem ser utilizados para evitar a contaminação por fungos e bactérias. Segue-se o protocolo para preparar placas NGM:
- Pesar 15 g de á....
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Discussão
Mutagênese é uma técnica amplamente empregada para estudos genéticos em vários organismos modelo experimental. Experimentos de mutagênese são freqüentemente usados para identificar a função de um gene 2. Os procedimentos de mutagênese descritos aqui podem ser usados não apenas para P. pacificus, mas também para C. elegans e de outras espécies de nematóides relacionados. Aqui nós descrevemos dois métodos, EMS e TMP / UV mutagênese.
EMS é uma substância química.......
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Divulgações
Não há conflitos de interesse declarados.
Agradecimentos
Este trabalho foi financiado pela NSF conceder IOB # 0615996.
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Referências
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- Sommer, R. J., Carta, L. K., Kim, S. Y. Fundamental and Applied Nematology. 19 (6), 511-511 (1996).
- Pires-daSilva, A., Sommer, R. J. Gene....
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Reimpressões e permissões
