Введение в Worm Лабораторная работа: от культивирования червей для мутагенеза
Summary
Скрининг на мутантов с фенотипическими дефектов простой метод для выявления генов, которые функционируют в данный биологический процесс. В этой статье мы опишем, как культура свободного червей жизни (например,<em> Pristionchus расШсиз</em>) В лабораторных и показывают два различных метода мутагенеза, EMS и TMP / UV.
Abstract
Этот протокол описывает процедуры для поддержания нематод в лаборатории и, как mutagenize их с помощью двух альтернативных способов: этиловый сульфонат метана (EMS) и 4, 5, 8-trimethylpsoralen в сочетании с ультрафиолетовым светом (TMP / UV). Нематоды являются мощными биологическими системами для ДНК-исследований из-за их простой план тела и система скрещивания, в состав которого входят самооплодотворяющимися гермафродиты и мужчин, которые могут генерировать сотни потомства на одно животное. Нематоды ведутся в агара чашки, содержащие газон бактерий и могут быть легко перенесены из одной пластины к другой, используя выбор. EMS является алкилирующего агента обычно используется, чтобы вызвать точечные мутации и малых удалений, в то время как TMP / UV основном вызывает удалений. В зависимости от вида нематод используются, концентрации EMS и TMP должны быть оптимизированы. Чтобы изолировать рецессивных мутаций расШсиз нематоды Pristionchus, животные F2 поколения были визуально обследование на фенотипы. Для иллюстрации этих методов мы мутагенизированных червей и искали Несогласованные (UNC), унылый (DPY) и трансформатор (TRA) мутантов.
Protocol
Discussion
Мутагенеза является широко применяется методика генетических исследований в различных экспериментальных модельных организмов. Мутагенез эксперименты часто используется для определения функций генов 2. Мутагенеза процедур, описанных здесь, может использоваться не только для <…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Эта работа была осуществлена за счет гранта NSF IOB # 0615996.
Referências
- Brenner, S. . Genética. 77 (1), 71-71 (1974).
- Anderson, P. . Methods Cell Biol. 48, 31-31 (1995).
- Yandell, M. D., Edgar, L. G., Wood, W. B. . Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 91 (4), 1381-1381 (1994).
- Pires-daSilva, A. . WormBook. , 1-1 (2005).
- Kenning, C., Kipping, I., Sommer, R. . J. Genesis. 40 (3), 176-176 (2004).
- Sommer, R. J., Carta, L. K., Kim, S. Y. . Fundamental and Applied Nematology. 19 (6), 511-511 (1996).
- Pires-daSilva, A., Sommer, R. J. . Genes & development. 18 (10), 1198-1198 (2004).
- Wei, A., Yuan, A., Fawcett, G. . Nucleic acids research. 30 (20), 110-110 (2002).
- Jorgensen, E. M., Mango, S. E. . Nat Rev Genet. 3 (5), 356-356 (2002).
