Introducción al Laboratorio de Worm: El cultivo de gusanos de Mutagénesis
Summary
La detección de mutantes con defectos fenotípicos es un método sencillo para identificar los genes que funcionan en un determinado proceso biológico. En este artículo se describe cómo los gusanos que viven la cultura libre (por ejemplo,<em> Pristionchus pacificus</em>) En el laboratorio y mostrar dos métodos diferentes de mutagénesis, EMS y TMP / UV.
Abstract
Este protocolo describe los procedimientos para mantener los nematodos en el laboratorio y la forma de mutagenizar utilizando dos métodos alternativos: etil metano sulfonato (EMS) y 4 ", 5, 8 trimetilpsoraleno-combinada con la luz ultravioleta (TMP / UV). Los nematodos son potentes sistemas biológicos para estudios de genética, debido a su plan de cuerpo simple y el sistema de apareamiento, que se compone de auto-fertilización de los hermafroditas y los hombres que pueden generar cientos de progenie por animal. Los nematodos son mantenidos en placas de agar que contiene un césped de bacterias y se pueden transferir fácilmente a partir de un plato a otro con un pico. EMS es un agente alquilante comúnmente utilizadas para inducir mutaciones puntuales y deleciones pequeñas, mientras que TMP / UV induce principalmente supresiones. Dependiendo de las especies de nematodos que se utiliza, las concentraciones de EMS y TMP tendrá que ser optimizada. Para aislar las mutaciones recesivas del nematodo Pristionchus pacificus, los animales de la generación F2 fueron examinados visualmente para fenotipos. Para ilustrar estos métodos, mutagénesis gusanos y buscó falta de coordinación (UNC), Cochambrosa (dpy) y transformador (TRA) mutantes.
Protocol
Discussion
Mutagénesis es una técnica ampliamente utilizada para los estudios genéticos en varios organismos modelo experimental. Experimentos de mutagénesis se utilizan a menudo para identificar la función de un gen 2. Los procedimientos de mutagénesis descritos aquí pueden ser utilizados no sólo para P. pacificus, sino también para C. elegans y otras especies de nematodos relacionados. Aquí se describen dos métodos, EMS y mutagénesis TMP / UV.
EMS es una susta…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Este trabajo ha sido financiado por la NSF subvención IOB # 0615996.
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