वयस्क मच्छरों (ए gambiae) में आरएनएआई Assays के लिए प्रोटोकॉल
Summary
रिवर्स आनुवंशिक दृष्टिकोण मच्छरों में वेक्टर रोगजनकों के लिए जो जीन underly प्रतिरोध का निर्धारण करने के लिए अत्यंत उपयोगी सिद्ध कर दिया है. यह वीडियो एक Dimopoulos प्रयोगशाला द्वारा प्रयोग किया जाता विधि एनोफ़ेलीज़ gambiae, मच्छरों, जो मलेरिया परजीवी बंदरगाह में dsRNA इंजेक्षन प्रोटोकॉल दिखाता है. इंजेक्शन सेटअप छेड़खानी और छाती में dsRNA इंजेक्शन तकनीक सचित्र है.
Abstract
रिवर्स आनुवंशिक दृष्टिकोण मच्छरों में वेक्टर रोगजनकों के लिए जो जीन underly प्रतिरोध का निर्धारण करने के लिए अत्यंत उपयोगी सिद्ध कर दिया है. यह वीडियो एक Dimopoulos प्रयोगशाला द्वारा प्रयोग किया जाता विधि एनोफ़ेलीज़ gambiae, मच्छरों, जो मलेरिया परजीवी बंदरगाह में dsRNA इंजेक्षन प्रोटोकॉल दिखाता है. इंजेक्शन सेटअप छेड़खानी और छाती में dsRNA इंजेक्शन तकनीक सचित्र है.
Protocol
Discussion
जीन मुंह बंद करने की क्षमता अत्यधिक परिवर्तनशील है और प्रतिलेख और मोड़ पर दरों प्रोटीन, कोशिकाओं और अंगों द्वारा और dsRNA तेज दक्षता सहित कारकों की एक संख्या पर निर्भर करता है. हमने पाया है कि मुंह बंद करने के रूप ?…
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Megascript | kit | Ambion | for dsRNA synthesis; T7 RNA polymerase-mediated in vitro transcription reaction | |
| RNeasy | Qiagen | For dsRNA purification | ||
| dsRNA | should be quantified and adjusted to 3 μg/ μL in water | |||
| fine-tipped forceps | ||||
| glass slide | ||||
| glass microcapillary needles | ||||
| microinjector | Drummond | Nanoject II | ||
| light microscope | mounted above a cold block | |||
| Petri dish | covered, glass | |||
| paper towels | ||||
| 10% sucrose | food | |||
| A. gambiae | Animal | mosquitos |
