פרוטוקול מבחני RNAi ב למבוגרים יתושים (א gambiae)
Summary
גישות גנטיות הפוך הוכיחו שימושי ביותר לקביעת אילו גנים בבסיס התנגדות לפתוגנים וקטור יתושים. פרוטוקול זה ממחיש וידאו שיטה המשמשת את המעבדה Dimopoulos להזריק לתוך dsRNA אנופלס gambiae יתושים, אשר בנמל טפיל המלריה. הטכניקה מניפולציה ההתקנה הזרקה והזרקת dsRNA לתוך החזה מודגם.
Abstract
גישות גנטיות הפוך הוכיחו שימושי ביותר לקביעת אילו גנים בבסיס התנגדות לפתוגנים וקטור יתושים. פרוטוקול זה ממחיש וידאו שיטה המשמשת את המעבדה Dimopoulos להזריק לתוך dsRNA אנופלס gambiae יתושים, אשר בנמל טפיל המלריה. הטכניקה מניפולציה ההתקנה הזרקה והזרקת dsRNA לתוך החזה מודגם.
Protocol
Discussion
יעילות של השתקת הגן משתנה מאוד ותלוי במספר גורמים, כולל תמליל וחלבון להתהפך שיעורי, יעילות ספיגת dsRNA על ידי תאים ואיברים. מצאנו כי ההשתקה מתחיל מוקדם ככל 1 שלאחר הזרקת יום והוא יכול להימשך עד 6 ימים שלאחר הזריקה. השתמש תמליל וחלבון שיטות זיהוי כגון PCR כמותי ומערב סופג כדי לאמת את הה…
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Megascript | kit | Ambion | for dsRNA synthesis; T7 RNA polymerase-mediated in vitro transcription reaction | |
| RNeasy | Qiagen | For dsRNA purification | ||
| dsRNA | should be quantified and adjusted to 3 μg/ μL in water | |||
| fine-tipped forceps | ||||
| glass slide | ||||
| glass microcapillary needles | ||||
| microinjector | Drummond | Nanoject II | ||
| light microscope | mounted above a cold block | |||
| Petri dish | covered, glass | |||
| paper towels | ||||
| 10% sucrose | food | |||
| A. gambiae | Animal | mosquitos |
