성인 모기 (A. gambiae)에서 RNAi의 Assays을위한 프로토콜

Summary

역방향 유전자 접근 방법은 모기에 벡터 병원균하는 유전자 underly 저항을 결정하는 매우 유용하게 입증했습니다. 이 비디오 프로토콜은 말라리아 기생충을 항구 아노 펠 레스 모기 gambiae로 dsRNA를 주입하기 위해 Dimo​​poulos 연구실에서 사용하는 방법을 보여줍니다. 사출 설정을 조작하고 흉부에 dsRNA를 주입 기술은 그림이다.

Abstract

역방향 유전자 접근 방법은 모기에 벡터 병원균하는 유전자 underly 저항을 결정하는 매우 유용하게 입증했습니다. 이 비디오 프로토콜은 말라리아 기생충을 항구 아노 펠 레스 모기 gambiae로 dsRNA를 주입하기 위해 Dimo​​poulos 연구실에서 사용하는 방법을 보여줍니다. 사출 설정을 조작하고 흉부에 dsRNA를 주입 기술은 그림이다.

Protocol

모기에 RNAi – 중재 유전자 입을 관심의 유전자를 대상으로 특정 dsRNAs의 사전 준비 및 정화가 필요합니다. dsRNA 합성을 위해, 우리는 T7 RNA 시험 관내 전사 반응에서 효소 – 중재의 사용을 만드는 앰비온의 Megascript 키트를 권장합니다. dsRNA 정화를위한, 우리는 Qiagen RNeasy 키트를 권장합니다. dsRNA의 샘플은 계량 3 μg / 물 μL 조정해야합니다. 당신이 필요합니다 다른 자료는 다음과 같습니?…

Discussion

유전자 입을의 효율성은 매우 다양하고 세포와 기관에 의해 증명서 및 단백질 턴 오버 요금 및 dsRNA의 이해 효율을 포함한 여러 가지 요인에 따라 달라집니다. 우리는 입을는 이르면 1로 일 게시 주사를 시작하고 최대 6 일 게시 주입 지난 수있는 것으로 나타났습니다. 입을를 확인하기 위해 모래 바닥 같은 양적 PCR과 서양 등 증명서와 단백질 검출 방법을 사용합니다.

Materials

Material Name	Tipo	Company	Catalogue Number	Comment
Megascript	kit	Ambion		for dsRNA synthesis; T7 RNA polymerase-mediated in vitro transcription reaction
RNeasy		Qiagen		For dsRNA purification
dsRNA				should be quantified and adjusted to 3 μg/ μL in water
fine-tipped forceps
glass slide
glass microcapillary needles
microinjector		Drummond	Nanoject II
light microscope				mounted above a cold block
Petri dish				covered, glass
paper towels
10% sucrose	food
A. gambiae	Animal			mosquitos