In Utero Intraventriculaire injectie en elektroporatie van de E16 Rat embryo's

Abstract

In-utero in-vivo injectie en elektroporatie van de embryonale rat neocortex is een krachtig hulpmiddel voor het manipuleren van individuele voorouders langs de wanden van de laterale ventrikel. Deze techniek wordt nu op grote schaal gebruikt om de processen die betrokken zijn bij corticogenesis door over-uitdrukken of neerhalen genen en het observeren van de effecten op de cellulaire proliferatie, migratie en differentiatie te bestuderen. In vergelijking met traditionele knock-out strategieën, in-utero elektroporatie biedt een snelle manier om een ​​populatie van cellen te manipuleren tijdens een bepaalde temporele venster. In deze video protocol, schetsen we de experimentele methode voor het bereiden van ratten voor een operatie, waardoor de baarmoeder hoornen door laporatomy, het injecteren van DNA in de laterale ventrikels van het zich ontwikkelende embryo, electroporating DNA in de voorouders langs de laterale wand, en de zorg voor dieren, post- operatie. Ons laboratorium maakt gebruik van dit protocol voor de operaties op E15-E21 ratten, maar het wordt meestal uitgevoerd op E16 zoals in deze video.