In Utero intraventrikuläre Injektion und Elektroporation von E16 Rattenembryonen

Abstract

In-utero in-vivo-Injektion und Elektroporation von embryonalen Ratten Neocortex ist ein leistungsstarkes Tool für die Manipulation von einzelnen Vorfahren an den Wänden der Seitenventrikel. Diese Technik ist mittlerweile weit verbreitet, um die Prozesse in Kortikogenese durch Überexpression oder umzuwerfen Gene und beobachten die Auswirkungen auf die zelluläre Proliferation, Migration und Differenzierung beteiligt zu studieren. Im Vergleich zu traditionellen Ko-Strategien, bietet in-utero Elektroporation eine schnelle Mittel, um eine Population von Zellen in einem bestimmten Zeitfenster zu manipulieren. In diesem Video-Protokoll, skizzieren wir die experimentelle Methodik zur Vorbereitung Ratten für eine Operation, Freilegung der Uterushörner durch laporatomy, Injektion von DNA in die Seitenventrikel des sich entwickelnden Embryos, Elektroporation von DNA in den Vorläuferzellen entlang der Seitenwand und Pflege von Tieren nach Chirurgie. Unser Labor nutzt dieses Protokoll für Operationen auf E15-E21 Ratten, aber es ist am häufigsten bei E16 durchgeführt, wie in diesem Video gezeigt.