प्रेरण और चूहे में सक्रिय विलंबित प्रकार hypersensitivity (डीटीएच) के निगरानी

Summary

विलंबित प्रकार hypersensitivity (डीटीएच) एक सूजन प्रतिक्रिया CCR7 effector स्मृति टी lymphocytes द्वारा मध्यस्थता है. यहाँ हम का प्रदर्शन कैसे लुईस चूहों में सक्रिय डीटीएच प्रेरित करने और भड़काऊ प्रतिक्रिया की निगरानी.

Abstract

विलंबित प्रकार hypersensitivity (डीटीएच) एक सूजन प्रतिक्रिया CCR7 effector स्मृति टी lymphocytes कि एक प्रतिजन के खिलाफ जो प्रतिरक्षा प्रणाली primed किया गया है इंजेक्शन के साइट घुसपैठ द्वारा मध्यस्थता है. भड़काऊ प्रतिक्रिया और प्रतिजनी चुनौती के साइट की लालिमा और सूजन की विशेषता है. यह एक सुविधाजनक मॉडल immunosuppressants के vivo प्रभावकारिता में निर्धारित है. प्रतिजन विशेष टी lymphocytes के दत्तक हस्तांतरण या एक प्रतिजन, और दिया त्वचा के क्षेत्र में भड़काऊ प्रतिक्रिया को प्रेरित करने के लिए प्रतिजन के साथ बाद intradermal चुनौती के साथ सक्रिय प्रतिरक्षण द्वारा Cutaneous डीटीएच भी प्रेरित कर सकते हैं. डीटीएच प्रतिक्रियाओं विभिन्न एंटीजन को ovalbumin, ट्यूबरकुलीन, टिटनेस toxoid, या ताली लगाने का छेद लंगड़ाहट hemocyanin (KLH) के उदाहरण के लिए, प्रेरित किया जा सकता है.

यहाँ हम प्रदर्शन कैसे लुईस चूहों में एक सक्रिय डीटीएच प्रतिक्रिया उत्पन्न करने के लिए. हम पहले Freund सहायक पूरा करने में KLH, ब्याज की हमारे प्रतिजन के पानी में तेल पायस तैयार करेंगे और इस पायसन चूहों को subcutaneously इंजेक्षन. यह प्रतिरक्षा प्रणाली स्मृति टी KLH के लिए निर्देश कोशिकाओं को विकसित प्रधानमंत्री जाएगा. सात दिन बाद हम चूहों intradermally KLH के साथ पीठ पर एक तरफ और ovalbumin, एक अप्रासंगिक प्रतिजन के साथ दूसरी तरफ, चुनौती. भड़काऊ प्रतिक्रिया दिखाई 16-72 घंटे बाद हो जाएगा और लाल और सूजन क्षेत्र डीटीएच गंभीरता का एक संकेत के रूप में मापा जाएगा.

Protocol

1. पायस की तैयारी ovalbumin, टेटनस toxoid, जलीय घोल में ताली लगाने का छेद लंगड़ाहट hemocyanin ….) Freund सहायक को पूरा करने के लिए कहा: पायस प्रतिजन की एक 1:1 मिश्रण (डीटीएच विभिन्न प्रतिजनों के लिए प्रेरित किया जा सकता है. यह ब?…

Discussion

डीटीएच प्रतिक्रिया का एक और अधिक सटीक माप के लिए हम कान के पंख में प्रतिजन के साथ चूहों को चुनौती देने की सलाह देते हैं. प्रतिक्रिया तो प्रासंगिक कान प्रतिजन को चुनौती दी है और या तो खारा अकेले के साथ चुनौती दी ह…

Materials

Material Name	Tipo	Company	Catalogue Number	Comment
Complete Freund’s adjuvant H37Ra	Reagent	Difco	231131	Distributed by Fisher under catalog # DF 311-360-5
Keyhole Limpet hemocyanin	Reagent	Sigma	H-5654
Ovalbumin	Reagent	Sigma	A-5503
5 ml glass syringes	Tool	Fisher	14-823-10 B	Need two 5 ml syringes for each batch of 5 ml of emulsion
18G metal bridge	Tool	Fisher	14-825-17L
Lewis rats	Animal	Harlan Sprague Dawley		Female rats 7-9 weeks old
23G 1″ needles	Tool	Fisher	14-826 AA	It is best to change needles between rats
3 ml Luer Lock syringes	Tool	Fisher	05-561-63
DPBS	Reagent	Gibco/Invitrogen	14040-182
1 ml regular tip syringes	Tool	Fisher	22-257-154
27G 1/2″ needles	Tool	Fisher	14-826-48
Electric cordless trimmer	Tool	Braintree Scientific	CLP-32130	To shave the rats before antigen challenge in the back.

Use sterile solutions reagents and syringes. The glass syringes and 18G bridges can be autoclaved. Read material data sheet before handling a reagent for the first time and wear appropriate protective equipment.