Induzione e Monitoraggio di Active ipersensibilità di tipo ritardato (DTH) in ratti

Summary

Ipersensibilità di tipo ritardato (DTH) è una reazione infiammatoria mediata dai linfociti memoria CCR7-T effettrici. Qui mostriamo come per indurre DTH attivo nei ratti Lewis e monitorare la risposta infiammatoria.

Abstract

Ipersensibilità di tipo ritardato (DTH) è una reazione infiammatoria mediata dai linfociti memoria CCR7-T effettrici che si infiltrano nel sito di iniezione di un antigene contro il quale il sistema immunitario è stato innescato. La reazione infiammatoria è caratterizzata da arrossamento e gonfiore nel sito di uno stimolo antigenico. Si tratta di un modello pratico per determinare l'efficacia in vivo di immunosoppressori. DTH cutanea può essere indotta in seguito a trasferimenti adottivo di antigene-specifica dei linfociti T o per l'immunizzazione attiva con un antigene, e la successiva sfida intradermica con l'antigene per indurre la reazione infiammatoria della pelle in una zona determinata. Risposte DTH può essere indotto a vari antigeni, per esempio ovalbumina, tubercolina, tossoide tetanico, o buco della serratura patelle hemocyanin (KLH).

Qui mostriamo come per indurre una reazione attiva DTH nei ratti Lewis. Per prima cosa preparare un acqua in emulsione di olio KLH, antigene di nostro interesse, in adiuvante completo di Freund e questa emulsione iniettare per via sottocutanea nei ratti. Questo sarà il primo sistema immunitario di sviluppare cellule T di memoria diretta a KLH. Sette giorni dopo ci sarà una sfida per i ratti intradermica sul retro con KLH da un lato e con ovalbumina, un antigene irrilevante, sul lato opposto. La reazione infiammatoria sarà visibile 16-72 ore più tardi e la zona rossa e gonfia sarà misurata come indice di gravità DTH.

Protocol

1. Preparazione della emulsione L'emulsione è una miscela 1:1 di antigene (DTH può essere indotto a vari antigeni: ovoalbumina, tossoide tetanico, buco della serratura patelle hemocyanin ….) in soluzione acquosa aggiunto per completare adiuvante di Freund. E 'molto importante aggiungere l'antigene per l'adiuvante e non viceversa! Ci sono un sacco di rifiuti al momento e iniettando una emulsione, in modo sempre preparare 1,5 o 2 volte più di quello che vi serve. …

Discussion

Per una misurazione più precisa della reazione DTH si consiglia sfida i topi con l'antigene nel padiglione dell'orecchio. La reazione può essere misurata come differenza all'orecchio gonfiore tra le pertinenti antigene-sfidato l'orecchio e l'orecchio sfidato sia con soluzione salina da solo o con l'antigene irrilevante. Una dimostrazione della sfida a livello dell'orecchio mostrato in 1.

Materials

Material Name	Tipo	Company	Catalogue Number	Comment
Complete Freund’s adjuvant H37Ra	Reagent	Difco	231131	Distributed by Fisher under catalog # DF 311-360-5
Keyhole Limpet hemocyanin	Reagent	Sigma	H-5654
Ovalbumin	Reagent	Sigma	A-5503
5 ml glass syringes	Tool	Fisher	14-823-10 B	Need two 5 ml syringes for each batch of 5 ml of emulsion
18G metal bridge	Tool	Fisher	14-825-17L
Lewis rats	Animal	Harlan Sprague Dawley		Female rats 7-9 weeks old
23G 1″ needles	Tool	Fisher	14-826 AA	It is best to change needles between rats
3 ml Luer Lock syringes	Tool	Fisher	05-561-63
DPBS	Reagent	Gibco/Invitrogen	14040-182
1 ml regular tip syringes	Tool	Fisher	22-257-154
27G 1/2″ needles	Tool	Fisher	14-826-48
Electric cordless trimmer	Tool	Braintree Scientific	CLP-32130	To shave the rats before antigen challenge in the back.

Use sterile solutions reagents and syringes. The glass syringes and 18G bridges can be autoclaved. Read material data sheet before handling a reagent for the first time and wear appropriate protective equipment.