Индукция и мониторинг активных гиперчувствительность замедленного типа (DTH) у крыс

Summary

Замедленного типа гиперчувствительности (DTH) является воспалительная реакция опосредована CCR7-эффекторные лимфоциты памяти T. Здесь показано, как вызвать активный DTH у крыс Льюиса и контролировать воспалительную реакцию.

Abstract

Замедленного типа гиперчувствительности (DTH) является воспалительная реакция опосредована CCR7-эффекторные Т-лимфоциты памяти, что проникнуть в месте введения антигена, против которого иммунная система была загрунтовать. Воспалительная реакция характеризуется покраснением и отеком сайт антигенный вызов. Это удобная модель для определения в естественных условиях эффективность иммунодепрессанты. Кожные DTH могут быть вызваны либо приемных передачи антиген-специфические Т-лимфоциты или активной иммунизации с антигеном, и последующие внутрикожные проблема с антигеном, чтобы вызвать воспалительную реакцию в данной области кожи. DTH реакции могут быть вызваны на различные антигены, например, яичный альбумин, туберкулин, столбняка, или замочную скважину блюдечко гемоцианин (KLH).

Здесь показано, как вызвать активную реакцию в DTH Льюис крыс. Мы сначала подготовить водно-нефтяной эмульсии из KLH, наш антиген представляющих интерес, в полном адъюванте Фрейнда и придать этой эмульсии подкожно крыс. Это будет премьер иммунной системы, чтобы развить память Т-клеток, направленных на KLH. Семь дней спустя мы будем вызов крыс внутрикожно на спине с KLH с одной стороны и с овальбумина, не имеет значения антиген, с другой стороны. Воспалительная реакция будет виден 16-72 часов спустя и красные и опухшие области будет оцениваться как указание DTH тяжести.

Protocol

1. Подготовка эмульсии Эмульсия смеси 1:1 антигена (DTH могут быть вызваны на различные антигены: яичный альбумин, столбняка, замочную скважину блюдечко гемоцианин ….) в водном растворе добавляется полный адъювант Фрейнда. Это очень важно, чтобы добавить антигена адъювантной а не нао…

Discussion

Для более точного измерения DTH реакцию мы рекомендуем сложных крыс с антигеном в ушной раковины из уха. Реакция может быть измерена как разница в ухе опухоль между соответствующим антигеном оспаривается уха и ухо оспаривается ни с солевым в одиночку или с антигеном не имеет значения. Демонстрация…

Materials

Material Name	Tipo	Company	Catalogue Number	Comment
Complete Freund’s adjuvant H37Ra	Reagent	Difco	231131	Distributed by Fisher under catalog # DF 311-360-5
Keyhole Limpet hemocyanin	Reagent	Sigma	H-5654
Ovalbumin	Reagent	Sigma	A-5503
5 ml glass syringes	Tool	Fisher	14-823-10 B	Need two 5 ml syringes for each batch of 5 ml of emulsion
18G metal bridge	Tool	Fisher	14-825-17L
Lewis rats	Animal	Harlan Sprague Dawley		Female rats 7-9 weeks old
23G 1″ needles	Tool	Fisher	14-826 AA	It is best to change needles between rats
3 ml Luer Lock syringes	Tool	Fisher	05-561-63
DPBS	Reagent	Gibco/Invitrogen	14040-182
1 ml regular tip syringes	Tool	Fisher	22-257-154
27G 1/2″ needles	Tool	Fisher	14-826-48
Electric cordless trimmer	Tool	Braintree Scientific	CLP-32130	To shave the rats before antigen challenge in the back.

Use sterile solutions reagents and syringes. The glass syringes and 18G bridges can be autoclaved. Read material data sheet before handling a reagent for the first time and wear appropriate protective equipment.