Gecikmiş tip aşırı duyarlılık (DTH) CCR7-efektör bellek T lenfositlerin aracılık ettiği inflamatuar bir reaksiyon. Burada Lewis sıçanlarda aktif DTH neden ve inflamatuar yanıt nasıl izleneceğini gösteriyor.
Abstract
Gecikmiş tip aşırı duyarlılık (DTH), bağışıklık sisteminin astarlanmalıdır karşı antijen enjeksiyonu site sızmaya CCR7 efektör bellek T lenfositleri aracılık ettiği inflamatuar bir reaksiyondur. Inflamatuar reaksiyon antijenik meydan yerinde kızarıklık ve şişme ile karakterize edilir. Immunsupresanların in vivo etkinliğini belirlemek için uygun bir model. Kutanöz DTH, antijen-spesifik T lenfositlerin evlatlık havalesi ile veya antijen ile aktif bağışıklama ve inflamatuar reaksiyon, belirli bir cilde alanda ikna etmek için antijen ile daha sonraki intradermal meydan tarafından başlatılabilir. DTH yanıtları örneğin ovalbumin, tüberkülin, tetanoz toksoidi ya da anahtar deliği limpet hemosiyanin (KLH), çeşitli antijenleri ikna edilebilir.
Burada nasıl ikna etmek için Lewis sıçanlarda aktif bir DTH reaksiyon göstermektedir. Önce, bizim ilgi antijen, KLH Freund adjuvan tam bir su-yağ emülsiyonu hazırlamak ve bu emülsiyon sıçanlara subkutan enjekte. Bu KLH yönlendirilmiş bellek T hücreleri geliştirmek için bağışıklık sistemini başbakan. Yedi gün sonra diğer tarafta, bir tarafta ve ovalbumin, ilgisiz bir antijen ile KLH ile geri intradermal sıçanlarda meydan okuyacaktır. Inflamatuar reaksiyon 16-72 saat sonra görülebilir ve kırmızı ve şişmiş alan DTH şiddetinin bir göstergesi olarak ölçülen olacaktır.
Protocol
1. Emülsiyon hazırlanması Emülsiyon antijen 1:1 karışımı (DTH çeşitli antijenleri ikna edilebilir ovalbumin, tetanoz toksoidi, sulu çözelti içinde anahtar deliği limpet hemosiyanin ….) Freund adjuvan tamamlamak için eklenen. Bu antijen adjuvan ve başka bir yol boyunca eklemek için çok önemlidir! Yapma ve bir emülsiyon enjekte atık bir sürü vardır, bu nedenle her zaman ihtiyacınız olandan 1.5 ya da 2 kez daha fazla hazırlamak. 2 mg / ml so…
Discussion
DTH reaksiyon daha hassas bir ölçüm için, kulak kepçesi antijen ile sıçan zorlu tavsiye ederiz. Reaksiyon sonra kulakta şişme ilgili antijen-meydan kulak ve kulak ya da serum fizyolojik tek başına ya da alakasız bir antijen ile meydan arasında bir fark olarak ölçülür. Kulak meydan okuma bir gösteri 1'de gösterilmiştir.
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Materials
Material Name
Tipo
Company
Catalogue Number
Comment
Complete Freund’s adjuvant H37Ra
Reagent
Difco
231131
Distributed by Fisher under catalog # DF 311-360-5
Keyhole Limpet hemocyanin
Reagent
Sigma
H-5654
Ovalbumin
Reagent
Sigma
A-5503
5 ml glass syringes
Tool
Fisher
14-823-10 B
Need two 5 ml syringes for each batch of 5 ml of emulsion
18G metal bridge
Tool
Fisher
14-825-17L
Lewis rats
Animal
Harlan Sprague Dawley
Female rats 7-9 weeks old
23G 1″ needles
Tool
Fisher
14-826 AA
It is best to change needles between rats
3 ml Luer Lock syringes
Tool
Fisher
05-561-63
DPBS
Reagent
Gibco/Invitrogen
14040-182
1 ml regular tip syringes
Tool
Fisher
22-257-154
27G 1/2″ needles
Tool
Fisher
14-826-48
Electric cordless trimmer
Tool
Braintree Scientific
CLP-32130
To shave the rats before antigen challenge in the back.
Use sterile solutions reagents and syringes. The glass syringes and 18G bridges can be autoclaved.
Read material data sheet before handling a reagent for the first time and wear appropriate protective equipment.
Beeton, C., Chandy, K. G. Induction and Monitoring of Active Delayed Type Hypersensitivity (DTH) in Rats. J. Vis. Exp. (6), e237, doi:10.3791/237 (2007).