Filamenteuze occlusie van het Midden-cerebrale slagader is een gemeenschappelijk model voor het bestuderen van ischemische beroerte in muizen.
Beroerte is een van de meest voorkomende oorzaken van sterfte en volwassen gehandicapten, met name in hoog ontwikkelde landen. Echter, de behandeling opties tot nu toe zijn zeer beperkt. Om te voldoen aan de behoefte aan nieuwe therapeutische benaderingen, experimenteel onderzoek beroerte heeft vaak knaagdiermodellen van focale cerebrale ischemie. De meeste onderzoekers gebruiken een permanente of tijdelijke occlusie van de midden cerebrale slagader (MCA) bij muizen of ratten.
Proximale occlusie van de midden cerebrale slagader (MCA) via de intraluminale hechting techniek (de zogenaamde filament of hechting model) is waarschijnlijk het meest gebruikte model in experimenteel onderzoek een beroerte. De intraluminale MCAO model biedt het voordeel dat het induceren van reproduceerbare tijdelijk of blijvend zijn ischemie van de MCA gebied in een relatief niet-invasieve manier. Intraluminale benaderingen onderbreekt de doorbloeding van het gehele grondgebied van deze slagader. Filament occlusie dus arrestaties vloeien proximaal van de lenticulo-gestreept slagaders, waardoor de basale ganglia leveren. Filament occlusie van de MCA resulteert in een reproduceerbaar laesies in de cortex en het striatum en kunnen permanent of van voorbijgaande aard. In tegenstelling, modellen inducerende distaal (aan de vertakking van de lenticulo-gestreept slagaders) MCA occlusie meestal sparen het striatum en in de eerste plaats betrekking op de neocortex. Naast deze modellen vereisen craniectomy. In het model gedemonstreerd in dit artikel, is een siliconen coating filament geïntroduceerd in de gemeenschappelijke halsslagader en geavanceerde langs de interne halsslagader in de Cirkel van Willis, waar het blokkeert de oorsprong van de midden cerebrale slagader. Bij patiënten, occlusies van de middelste cerebrale slagader behoren tot de meest voorkomende oorzaken van ischemische beroerte. Omdat verschillende ischemische intervallen kunnen vrij gekozen worden in dit model, afhankelijk van het tijdstip van de reperfusie, ischemische letsels met een verschillende mate van ernst kan worden geproduceerd. Reperfusie door verwijdering van de afsluitende gloeidraad ten minste gedeeltelijk de restauratie van de bloedstroom modellen na een spontane of therapeutische (tPA) lysis van een trombo-embolische stolsel bij de mens.
In deze video presenteren we de basistechniek, alsmede de belangrijkste valkuilen en confounders die de voorspellende waarde van dit model kan beperken.
Het model van voorbijgaande aard, proximale MCA occlusie 18,19 hier gepresenteerde bootst een van de meest voorkomende vormen van ischemische beroerte bij patiënten. 20 op basis van variabele reperfusie tijden, het model verschillende soorten schade, variërend van transient ischaemic attack (TIA) naar grote aanbiedingen infarcten inclusief grote delen van de ischemische halfrond. Hierdoor kan de onderzoeker om te studeren verschillende pathofysiologische mechanismen na een beroerte. 20,21
Operatie kan worden uitgevoerd in een korte periode en produceert zeer reproduceerbare laesies. Toch is dit een grondige controle van de verstorende variabelen vereist. 22 Kleine verschillen in operatietechniek kan verantwoordelijk zijn voor verschillende effecten op het infarct. Bovendien 23,24, als gevolg van variaties in cerebrale vasculaire anatomie, verschillende muizenstammen laten een andere uitkomst. 25,26 Body temperatuur van invloed op neurologische schade, met hypothermie leidt tot kleinere laesies 27 en hyperthermie tot meer ernstige tekorten. 28 Daarom, temperatuur controle en onderhoud is van groot belang in dit model. 29 Bovendien, bloeddruk en gassen zijn belangrijke confounders van resultaat en de noodzaak om worden bewaakt. 30,31 Het gebruik van snelle en minimaal invasieve methoden (niet-invasieve bloeddrukmeting, geschikt en makkelijk toegankelijk bloedafname sites) wordt aanbevolen. De keuze van de narcose is ook zeer belangrijk, omdat sommigen hebben neuroprotectieve effecten, en / of vasodilatatoren, zoals bijvoorbeeld Isofluraan. 32 Daarom moet de blootstelling aan anesthesie worden zo kort mogelijk en gestandaardiseerd. We sluiten dieren die een operatie hebben ondergaan langer dan 15 minuten.
Het scheren van de operatiewond produceert microabrasions en ontsteking en geeft haar fragmenten. Dit kan verder toenemen ontsteking en stimuleren lokale infectie, die invloed kan hebben op een beroerte pathofysiologie. Huisvesting, in het bijzonder het gebruik van verrijking, kunnen van invloed zijn beroerte uitkomst en moeten worden gestandaardiseerd en beschreven in onderzoeksrapporten. 6,33,34 Het gebruik van milieu-verrijking en het effect ervan op de reproduceerbaarheid is een onderwerp van discussie. 35 Een andere belangrijke confounder is het beroerte verhoogd risico op infectie vooral na lange tijden van ischemie 36, wat leidt tot extra morbiditeit en een verhoogde mortaliteit. 37,38 als infecties worden symptomatisch rond dag 3 tot 5, heeft dit belangrijke gevolgen voor de lange termijn follow-up in dergelijke modellen.
Voor de productie van de resultaten relevant zijn voor de ontwikkeling van nieuwe behandelingsstrategieën voor een beroerte, standaardisatie en kwaliteitsbewaking is zeer belangrijk in preklinisch translationeel onderzoek beroerte 39 "Good Laboratory Practice" 40,41 mandaten.:
The authors have nothing to disclose.
Dit werk werd gefinancierd door het zevende van de Europese Gemeenschap Kaderprogramma (FP7/2007-2013) onder subsidieovereenkomst n ° 201024 en nr. 202213 (European Stroke Network). Aanvullende financiering werd gegeven door de Bundesministerium für Bildung und Forschung (Centrum voor Onderzoek Stroke Berlijn), en de Deutsche Forschungsgemeinschaft (Exzellenzcluster NEUROCURE).
De auteurs willen graag Mareike Thielke (Dep. voor Experimentele Neurologie, Charite Berlin) bedanken voor de steun tijdens de operatie en Elke Ludwig (Charite Video Services) voor de productie van de animatie.
Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
Surgical scissors (skin cut) | FST | 14028-10 | ||
2 Dumont forceps (Medical #5 straight tip) | FST | 11253-20 | ||
Spring scissors (according to Vannas) | FST | 15000-00 | ||
Applying forceps for micro clamps | FST | 00072-14 | ||
Micro vascular clamp (e.g. S&G B1-V) | FST | 00396-01 | Also Serrefine possible | |
2 Hemostats according to Hartmann | FST | 13002-10 | ||
Needle holder (according Olsen-Hegar or other) | FST | 12002-14 | ||
Standard anatomical forceps (for wound closure) | FST | 11000-12 | ||
5/0 sutures | Suprama | for vascular ligatures | ||
6/0 sutures | Suprama | for skin suture, 5/0 also possible | ||
Lidocaine (e.g. Xylocain Gel 2%) | Astra Zeneca | or other local pain relief | ||
Dissecting microscope (stereo microscope), magnification 6x to max. 40x | Leica Zeiss | MZ6 Stemi2000C | ||
Cold light source | Leica | KL1500 | ||
Temperature feedback controlled heating pad system | FST | 21052-00 | With mouse pad and small probe | |
Anaethesia system for isoflurane | ||||
Isoflurane | Abott | |||
Veterinary Recovery Chamber | Peco Services | V1200 | Heated cage | |
8.0 nylon filament | Suprama | TEL181005 | for coating | |
Scalpel | For cutting filament in pieces | |||
Ruler | To cut correct length of filament | |||
Xantopren M Mucosa | Heraeus Kulzer | |||
Activator Universal Plus | Heraeus Kulzer | Optosil – Xantopren | ||
2 Dumont forceps (Medical #5 straight tip) | FST | 11253-20 | ||
A soft underlay for storing and grasping the uncoated filaments | e.g. swabs, foam, … | |||
Receptacle for new build filaments | e.g. petri dish, flexible foam,… |