Hyperinsulinemic - المشبك سوي سكر الدم في الفئران وإدراكا
Summary
المشبك hyperinsulinemic سوي سكر الدم ، هي "المعيار الذهبي" لتقييم عمل الانسولين. هي التي غرست الأنسولين بمعدل ثابت تحفيز امتصاص الجلوكوز. كمية الجلوكوز الخارجية التي غرست لمواجهة هذا الانخفاض هو دليل على حساسية الانسولين. هنا يتم تنفيذ الإجراء على الفئران ، واعية غير المقيد.
Abstract
السكري من النوع 2 (T2D) يتزايد تزايدا سريعا في الانتشار. تميزت إما عدم كفاية إنتاج الأنسولين أو عدم القدرة على الاستفادة من الأنسولين المنتج ، والنتائج T2D في ارتفاع مستويات السكر في الدم. "الذهب القياسية" في تقييم الحساسية للانسولين هو المشبك سوي سكر الدم ، أو hyperinsulinemic المشبك الانسولين. في هذا الإجراء ، هي التي غرست الأنسولين بمعدل ثابت أدى إلى انخفاض في مستوى السكر في الدم. للحفاظ على مستوى السكر في الدم عند مستوى ثابت ، هي التي غرست الجلوكوز الخارجية (D50) إلى الدورة الدموية الوريدية. كمية الجلوكوز التي غرست في الحفاظ على التوازن يدل على حساسية الانسولين. هنا ، نظهر الإجراء المشبك الأساسية في مقسطر مزمنة ، الفئران ، غير المقيد واعية. هذا النموذج يسمح جمع الدم مع التشديد على الحد الأدنى من الحيوان. بعد التخدير ، يتم إجراء شق خط الوسط واليسار مقسطر الشريان السباتي المشترك وحبل الوريد الصحيح. يتم مسح إدخال القسطرة مع heparinized المالحة ، ثم exteriorized والمضمون. مسموح للحيوانات لاسترداد 4-5 أيام قبل التجارب ، مع زيادة الوزن مراقبتها يوميا. تستخدم فقط تلك الحيوانات تستعيد الوزن الذي لمستويات ما قبل الجراحة لإجراء التجارب. في يوم من التجربة ، وصام الفئران وتوصيلها الى المضخات التي تحتوي على الانسولين وD50. ويتم تقييم الجلوكوز من خط الأساس الشرايين ويستخدم معيارا في كافة مراحل التجربة (سوائية سكر الدم). بعد هذا ، هي التي غرست الأنسولين بمعدل ثابت إلى الدورة الدموية الوريدية. لتتناسب مع انخفاض في نسبة السكر في الدم ، هي التي غرست D50. إذا كان معدل ضخ D50 أكبر من معدل امتصاص ، وارتفاع في نسبة الجلوكوز تحدث. وبالمثل ، إذا كان معدل غير كافية لامتصاص الغلوكوز تطابق كامل الجسم ، وسوف يحدث انخفاض. المعايرة من الجلوكوز تستمر حتى يتم تحقيق قراءات الجلوكوز مستقرة. وتسجل مستويات الغلوكوز ومعدلات ضخ الجلوكوز خلال هذه الفترة استقرارا والإبلاغ عنها. النتائج توفر فهرس كامل الجسم حساسية الانسولين. ويمكن صقل هذه التقنية لتلبية متطلبات محددة التجريبية. وتعزز ذلك عن طريق استخدام استشفاف المشعة التي يمكن تحديد الأنسجة للأنسولين محددة حفزت امتصاص الغلوكوز وكذلك دوران كامل الجسم الجلوكوز.
Protocol
Discussion
وضعت في البداية للتحقيق في حساسية الانسولين في البشر ، وقد تم الآن إجراء المشبك تتكيف مع الأنواع الأخرى بما فيها الجرذان والفئران المختبرية. النماذج الحيوانية التحقيق في مقاومة الانسولين يقدم مساعدات كبيرة في فهم الفيزيولوجيا المرضية للحساسية والأمراض المرتبطة ال…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
وأيد هذه الدراسة من قبل المعاهد الكندية لأبحاث الصحة وCanada.JS الجينوم يحمل جوائز الدعم من الراتب للأبحاث الطبية Foundationfor التراث ألبرتا ، والقلب والسكتة الدماغية من مؤسسة Canadaand جمعية السكري الكندية. شكر خاص للدكتور ديفيد واسرمان Bracy ضربة موفقة لتدريس هذا الإجراء إلى المختبر شيرر.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
| Intramedic Polyethylene Tubing (PE-50) | Fisher Scientific | 14-170-12B | Internal diameter of .58mm (.023″) x Outer diameter of .965mm (.038″) |
| Dow Corning Silastic Laboratory Tubing | Fisher Scientific | 11-189-15C | Internal diameter of .76mm (0.030″) x Outer diameter of 1.65mm (0.065″) |
| Tygon S-50-HL Medical Tubing | Harvard Apparatus | PY2 72-1251 | Internal diameter of 3.2mm (0.125″) x Outer diameter of 4.7mm (0.1875″) |
| Loctite Super Glue | Grand & Toy | 32237 | Gel Control |
| Sterile Surgical Blade | VWR | BD371610 | |
| Curved Micro Dissecting Forceps | George Tiemann & Co. | 160-20 | x 2 |
| Straight Micro Dissecting Forceps | George Tiemann & Co. | 160-15 | x 2 |
| Curved Hemostat | George Tiemann & Co. | 105-1135 | x 2 |
| Straight Hemostat | George Tiemann & Co. | 105-1130 | x 2 |
| Hemostat Tip Guards | Robbins Instruments, Inc. | 15.09-2-004 | |
| Straight Surgery Scissors | George Tiemann & Co. | 105-402 | |
| VENOJECT Multi-Sample Luer Adapter | Terumo Medical Products | 810127A | 21 guage, 1 in. |
| Sterile Catheter Introducer | Becton Dickinson | 406999 | |
| 14-gauge Blunt Needle | Becton Dickinson | 511310 | 14 guage, 2 in. |
| Sterile Surgical Suture | Johnson & Johnson Medical Products | 1679H | Silk, size 3-0 |
| Non-Sterile Surgical Suture | Angiotech Pharmaceuticals, Inc. | SP116 | Silk, size 4-0 |
| Cotton Swabs | VWR | 10806-005 | |
| 4ply Gauze Pads | VWR | CA43845-062 | |
| Small Animal Cordless Clippers | Harvard Apparatus | 729063 | |
| Isoflurane | Halocarbon Products Corp. | IPN-45 | |
| Anesthetic Cart | Benson Medical Industries, Inc. | ||
| 70 % Ethanol | Fisher Scientific | HC-1000 | |
| Betadine Antiseptic Solution | Western Drug Distribution Centre Ltd. | 105267 | |
| Model 11 Plus Syringe Pump | Harvard Apparatus | 702208 | |
| Stainless Steel Tubing Couplers | Harvard Apparatus | 72-4434 | 23 gauge, 0.3 in. |
| Stainless Steel Tubing Plugs | Harvard Apparatus | 72-4436 | 23 gauge, 0.5 in. |
| Stainless Steel Blunt Needles | Instech Laboratories, Inc. | LS22 | 22 gauge |
| 60 Degree Y-Connectors | Small Parts | STCY-22-05 | 22 gauge |
| CritSpin Micro-hematocrit Centrifuge | Iris Sample Processing | CS12 | |
| Mini Centrifuge | Fisher Scientific | 05-090-100 | |
| Micro Centrifuge Tubes | VWR | 53550-778 | |
| 50ml polypropylene centrifuge tubes | VWR | 89004-364 | |
| 1ml Plastic Slip Tip Syringes | Becton Dickinson | 309602 | |
| 3ml Plastic Luerlok Tip Syringes | Becton Dickinson | 309585 | |
| Heparin Anticoagulant Injection | Western Drug Distribution Centre Ltd. | 102824 | Manufacturer: LEO Pharma Inc. Conc. 1000 IU |
| EDTA Solution | Promega Corp. | V4231 | 0.5 M, pH 8.0 |
| Saline | Western Drug Distribution Centre Ltd. | ABB7983154 | Manufacturer: Hospira 0.9% Sodium Chloride |
| 50% Dextrose | Vetoquinol | 8DEX012D | |
| Humulin-R | Eli Lilly | HI-210 | 100U/ml |
| 1ml Insulin Syringes | Becton Dickinson | 309311 | |
| Fisherbrand* Hemato-Seal Sealant | Fisher Scientific | 02-678 | |
| Fisherbrand* Microhematocrit Capillary Tubes | Fisher Scientific | 22-362-574 | |
| One Touch Ultra Test Strips | LifeScan, Inc. | AW 085-314H | |
| One Touch Ultra Blood Glucose Meter | LifeScan, Inc. | AW 085-314B | |
| Sodium Pentobarbitol | Ceva Sante Animale | 1715 138 | Conc. 54.7mg/ml |
| Red Laboratory Labeling Tape | VWR | 89097-932 | |
| Blue Laboratory Labeling Tape | VWR | 89097-936 | |
| Weigh Scale | Fisher Scientific | 01-913-88 | |
| Vortex | VWR | 58815-234 | |
| Timer | VWR | 62344-641 |
Referências
- Halseth, A. E., Bracy, D. P., Wasserman, D. H. Limitations to basal and insulin-stimulated skeletal muscle glucose uptake in the high-fat-fed rat. Am J Physiol Endocrinol Metab. 279, E1064-E1071 (2000).
- Halseth, A. E., Bracy, D. P., Wasserman, D. H. Limitations to muscle glucose uptake due to high fat feeding. Am. J. Physiol. 279, E1064-E1071 (2000).
- Muniyappa, R., Lee, S., Chen, H., Quon, M. J. Current approaches for assessing insulin sensitivity and resistance in vivo: advantages, limitations, and appropriate usage. Am J Physiol Endocrinol Metab. 294, 15-26 (2008).
- Cho, H. Insulin resistance and a diabetes mellitus-like syndrome in mice lacking the protein kinase Akt2 (PKB beta). Science. 292, 1728-1731 (2001).
- Dubois, M. J. The SHP-1 protein tyrosine phosphatase negatively modulates glucose homeostasis. Nat Med. 12, 549-556 (2006).
- Pacini, G., Thomaseth, K., Ahren, B. Contribution to glucose tolerance of insulin-independent vs. insulin-dependent mechanisms in mice. Am J Physiol Endocrinol Metab. 281, 693-703 (2001).
- Herbach, N. Dominant-negative effects of a novel mutated Ins2 allele causes early-onset diabetes and severe beta-cell loss in Munich Ins2C95S mutant mice. Diabetes. 56, 1268-1276 (2007).
- Maeda, N. Diet-induced insulin resistance in mice lacking adiponectin/ACRP30. Nat Med. 8, 731-737 (2002).
- Potenza, M. A., Marasciulo, F. L., Tarquinio, M., Quon, M. J., Montagnani, M. Treatment of spontaneously hypertensive rats with rosiglitazone and/or enalapril restores balance between vasodilator and vasoconstrictor actions of insulin with simultaneous improvement in hypertension and insulin resistance. Diabetes. 55, 3594-3603 (2006).
- Ayala, J. E., Bracy, D. P., McGuinness, O. P., Wasserman, D. H. Considerations in the design of hyperinsulinemic-euglycemic clamps in the conscious mouse. Diabetes. 55, 390-397 (2006).
- Wasserman, D. H., Ayala, J. E., McGuinness, O. P. Lost in translation. Diabetes. 58, 1947-1950 (2009).
