Denna video visar en effektiv teknik för att skilja och dissekera de olika semi-transparent struktur av den mänskliga glaskropp i post mortem ögon.
Glaskroppen är ett optiskt klar, kollagen extracellulärmatrix som fyller insidan av ögat och overlies näthinnan. 1,2 Onormala interaktioner mellan glaskroppen delstrukturer och näthinnan ligger bakom flera vitreoretinala sjukdomar, inklusive näthinneruptur och avskildhet, fläckvisa rynka, fläckvisa hål, åldersrelaterad makuladegeneration, vitreomacular dragkraft, proliferativ vitreoretinopathy, proliferativ diabetesretinopati, och ärvda vitreoretinopathies. 1,2 Den molekylära sammansättningen av glaskroppen understrukturer inte är känd. Eftersom glaskroppen är öppen med begränsad kirurgisk åtkomst, har det varit svårt att studera dess understrukturer på molekylär nivå. Vi utvecklade en metod för att avskilja och bevara dessa vävnader för proteomik och biokemisk analys. Den dissekering tekniken i denna experimentella video visar hur isolera glaskroppen bas, främre hyaloid, glaskroppen kärna, och glaskroppen cortex från döden mänskliga ögon. Endimensionellt SDS-PAGE analys av varje glaskroppen komponent visade att våra dissektion teknik resulterat i fyra unika protein profiler som motsvarar varje underkonstruktion av den mänskliga glaskropp. Identifiering av differentiellt compartmentalized proteiner kommer att avslöja kandidat molekyler bakom olika vitreoretinala sjukdomar.
Glaskroppen är en semi-transparent gel som molekylär sammansättning är dåligt känd, speciellt i nivå med dess understrukturer: glaskroppen bas, core, cortex, och främre hyaloid. Glaskroppen kärna innehåller kollagen II, V, IX och XI, tillsammans med kondroitinsulfat proteoglykaner, Heparan proteoglykaner sulfat och hyaluronan. 1,2 biomarkörer Protein i glaskroppen kärnan har förknippats med sjukdomar såsom diabetesretinopati. 3-5 Hur dessa proteiner är differentiellt uttryckta i varje underkonstruktioner, och i många fall de specifika proteinet identiteter, inte är kända. Dessa detaljer kan ge insikt till ursprunget av proteiner i samband med särskilda vitreoretinala sjukdomar och hjälpa behandlingar rikta framtiden. Även om den optimala obduktionen intervall för mjukpapper dissektion inte har bestämts, kan proteinnedbrytning påverka nedströms experiment. Till exempel är immunohistokemi påverkas i 12-timmars obduktion ögon och en del specifika enzymaktivitet kan minskas inom ett par timmar (opublicerad observation). Alla vävnader i denna studie samlades in mellan 2 och 8 timmars död utan betydande förändringar i proteinuttryck eller lämplighet för proteomik analsyis. Den flytande kväve fryser konserveringsmetoder valts framför fixering för att förhindra att små förändringar i proteiners struktur orsakad av fixativ kors länkning, vilket har visats i andra vävnader av LC-MS/MS. 6 proteomik studier kommer att bero på förmågan att korrekt dissekera de olika fack i glaskroppen, vilket visas i denna video experiment. Vi har validerat dissektion teknik med hjälp av 1-dimensionella SDS-PAGE. Eftersom våra resultat tyder på, finns det differentiellt uttryckta proteinerna i olika delstrukturer glaskropp. Identifiera dessa proteiner kommer att ge en mer detaljerad förståelse av glaskroppen uppdelning.
The authors have nothing to disclose.
Finansieringen kom från Fight for Sight. Vävnader erhölls från Iowa Lions Eye Bank.
Name | Company | Catalog Number |
0.12 forceps | Storz Ophthalmics | E1502 |
5-cc syringe | Becton-Dickinson | 309603 |
Straight Dressing Forceps With Serrations | Storz Ophthalmics | E1400 |
23 gauge needle | Becton-Dickinson | 305145 |
Colibri forceps | Storz Ophthalmics | 2/132 |
Castroviejo angled corneal scissors | Storz Ophthalmics | E3223 |
Vannas Curved Capsulotomy Scissors | Storz Ophthalmics | E3387 |
Weck-Cel surgical spears | Medtronic | 0008680 |
Westcott Curved Tenotomy Scissors | Storz Ophthalmics | E3320 |