Purifying Plasmid-DNA aus Bakterien-Kolonien mit dem Qiagen Miniprep Kit

Abstract

Plasmid DNA Aufreinigung aus E. coli ist ein Kern-Technik für die molekulare Klonen. Kleine Reinigung (Miniprep) von weniger als 5 ml Bakterienkultur ist ein schneller Weg für Klon Überprüfung oder DNA-Isolierung, durch weitere enzymatische Reaktionen (Polymerase-Kettenreaktion und Restriktionsverdau) gefolgt. Hier haben wir das allgemeine Verfahren der Miniprep durch die QIAGEN QIAprep 8 Miniprep Kit, mit dem Ziel der Einführung dieser hoch effizienten Technik den allgemeinen Anfänger für molekularbiologische Techniken auf Video aufgezeichnet. Das gesamte Verfahren ist auf alkalischen Lyse von E. coli Zellen, die durch Adsorption von DNA an Silica folgte in der Gegenwart von hohen Salz. Es besteht aus drei Schritten: 1) Vorbereitung und Abwicklung von einer bakteriellen Lysat, 2) Adsorption von DNA an die Membran QIAprep, 3) Waschen und Elution von Plasmid-DNA. Alle Schritte werden ohne den Einsatz von Phenol, Chloroform, CsCl, Ethidiumbromid, und ohne Alkohol-Fällung durchgeführt. Es dauert in der Regel weniger als 2 Stunden, um die gesamte Vorgang zu beenden.