Purifying Plasmid DNA från kolonier Använda Qiagen Miniprep Kit

Abstract

Plasmid DNA-rening från E. coli är en central teknik för molekylär kloning. Småskalig rening (miniprep) från mindre än 5 ml bakteriekultur är ett snabbt sätt för klon verifiering eller isolering av DNA, följt av ytterligare enzymatiska reaktioner (polymeraskedjereaktion och restriktionsenzymanalys matsmältningen). Här har vi video-inspelade de allmänna förfarandena i miniprep genom QIAGEN är QIAprep 8 Miniprep Kit, som syftar till att införa detta mycket effektiv teknik för att den allmänna nybörjare för molekylärbiologisk teknik. Hela proceduren är baserad på alkalisk lys av E. coli-celler följt av adsorption av DNA på kisel i närvaro av höga salt. Den består av tre steg: 1) förberedelse och clearing av en bakteriell lysat, 2) adsorption av DNA på QIAprep membran, 3) tvättning och eluering av plasmid-DNA. Alla steg utförs utan användning av fenol, kloroform, CsCl, etidiumbromid och utan alkohol nederbörd. Det tar vanligtvis mindre än 2 timmar att slutföra hela förfarandet.