RNAi的干扰双链RNA注射到果蝇胚胎
Summary
RNA干扰已被证明非常有效的分析基因功能<em>果蝇</em>气管发展。说明了一个详细的协议，由江实验室用于注入飞胚胎击倒基因表达的dsRNA。这种技术的组织和器官的发育需要筛选基因的潜力<em>果蝇</em>。
Abstract
遗传筛查是为获得到复杂的生物过程的见解1最有力的方法之一。多年来许多改进和基因操纵的工具已成为在 果蝇 2 。后不久，3 Frie和梅洛的初步发现，双链RNA可以用来击倒的单个基因的线虫，RNA干扰（RNAi）是提供了强大的反向基因的方法来分析果蝇的器官发育基因的功能活动4，5。
许多器官，包括肺，肾，肝，和血管系统，是由支管网络，运输至关重要的液体或气体6，7。 果蝇气管形成的分析提供了一个极好的模型系统研究等8管状器官的形态发生。伯克利果蝇基因组计划已经发现了数百个，气管系统中表达的基因。要研究管形成的分子和细胞机制，面临的挑战是了解这些基因的作用在气管发展。在这里，我们描述了详细的双链RNA注射到果蝇胚胎敲除个别基因的表达方法。我们成功地撞倒内源性dysfusion（DYS）基因表达的dsRNA注射。 DYS是BHLH – PAS气管融合细胞表达的蛋白质，是气管的分支融合9，10所必需的。 DYS – RNA干扰完全消除DYS表达，并导致气管融合缺陷。这种相对简单的方法提供了一种工具来识别tissure 在果蝇的器官发育requried的基因。
Protocol
1。胚胎收集设立了25笼° C使用2-4日龄瓦特1118 flies.Grape汁板被改变白天每隔一小时同步前1-2天期间收集的鸡蛋收集收集胚胎为1小时25 ° C 切一块长方形的葡萄汁琼脂，用刀片轻轻切在中间，一条线留在琼脂使用一个金属探针胚胎从葡萄汁板转移到您的葡萄汁琼脂片，线在胚胎长在45度角，在琼脂中轴线的直线。获取胚胎约50直线。确保所有的胚胎点在同一方向，…
Discussion
双链RNA注射方法在座使一个非常敏感和快速的分析，在果蝇的基因功能的气管发展。这种方法有可能被应用到其他组织和器官的发育的基因功能分析。
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
作者希望感谢斯蒂芬克鲁斯dysfusion的cDNA，DYS抗体和W 1118苍蝇。
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Halocarbon oil 700 | Sigma-Aldrich | H8898 | ||
| Picospritzer III picopump | Parker Precision Fluidics | 051-0500-900 | ||
| Micro-pipettes | Fisher | 21170M | ||
| Microloaders | Eppendorf | 930001007 |
Referências
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Citar este artigo
Iordanou, E., Chandran, R. R., Blackstone, N., Jiang, L. RNAi Interference by dsRNA Injection into Drosophila Embryos. J. Vis. Exp. (50), e2477, doi:10.3791/2477 (2011).