성인 Drosophila의 머리에서 전체 셀 레코딩
Summary
이 비디오는 표준 전체 세포 기술을 사용하여 하나의 뉴런에서 레코딩을위한 준비 성인 Drosophila의 전체 머리를 분리하는 절차를 보여줍니다. 그것은 녹음하는 동안 많이 GFP 라벨 세포와 뉴런의 이미지가 포함되어 있습니다.
Abstract
이 비디오에서는, 우리는 하나의 뉴런에서 레코딩을위한 준비 성인 Drosophila의 전체 머리를 분리하는 절차를 보여줍니다. 우리는 해부 솔루션 및 우리의 연구에 사용되는 성인 여성의 캡처를 설명하여 시작합니다. 두 광 엽 (叶)을 포함하여 전체 두뇌 손상 제거하는 절차는 그림입니다. overlying의 기관의 해부도 표시됩니다. 고립된 두뇌는 작은뿐만 아니라하지만 뉴런의 손상을 방지하려면이 단계에서 취급에 특별한주의가 필요하는 많은 조직의 외부 표면 가까이에 있습니다. 우리가 개발한 특별한 소유자가 기록 챔버의 머리를 안정화하는 데 사용됩니다 방법을 보여줍니다. 표준 전기 생리학 최대가 뉴런의 단일 뉴런 또는 쌍의 기록에 사용됩니다 설정할 수 있습니다. (GH146) 프로젝션 뉴런 (PNS)가 살아있는 두뇌에 식별하는 방법을 보여줍니다 GFP 표현 운전 GAL4 라인에서 녹음 현미경을 통해 본 형광 이미지. 고전력 Nomarski 이미지는 전체 세포 녹음 대상으로되고 단일 신경 세포의보기를 표시합니다. 두뇌가 성공적으로 손상없이 제거되면, 뉴런의 대부분은 작업 잠재력 및 / 해고 또는 자발적인 시냅스 입력을 전시, 자발적으로 활성화됩니다. 전체 뇌 뉴런에서 확인된 전체 휴대폰 녹음이 유전 및 약리 조작과 조합하여 사용할 수있는 현장 준비에 이것은 성인 CNS의 세포 생리와 소성을 탐험에 유용한 모델입니다.
Protocol
Discussion
우리는이 동영상에서 보여주는 고립 전체 뇌 준비 흥분과 성인 Drosophila 두뇌 (특별시 및 O 다우드, 2006)에서 후각 처리 경로에 해당 포함한 식별 뉴런에서 신경 전달 기본 세포 메커니즘의 평가를하실 수 있습니다. 이 방법은 깨어있는 행동 포유류에서 녹음을 보완하는 포유류의 뇌 슬라이스의 뉴런에서 많은 동일한 방식으로 녹음에 손상 성인 Drosophila (윌슨 동부 표준시 모든 2004)의 두뇌에의 연결 활동 연구 보완…
Acknowledgements
이 작품은 DKOD에 NIH 부여 NS27501에 의해 지원되었다. 이 작품에 대한 추가 지원은 DKOD에 HHMI 교수 프로그램 권한 부여에 의해 제공되었다.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| #5 Foceps | Tool | FST by DUMONT | No. 11251-10 | Be careful, never damage the fine tips of forceps |
| Papain | Reagent | Worthington | 3126 | 20 U/ml activated by 1 mM L-cysteine |
| Dissecting microscope | SMZ-2B Model:C-PS | Nikon | Equipped with gooseneck fiber optic lights positioned a low angle | |
| Needle & Syringe | PrecisionGlide®?, Becton Dickinson & Co | 305175 & 309602 | Cheap and durable | |
| Upright microscope | Axioskop2 FS plus | Zeiss | Equipped with a fixed stage, 40X water immersion objective, Nomarski optics, and fluorescent lamp | |
| Patch clamp amplifier | 200 B | Molecular device | ||
| Digidata D-A converter | 1322A | Molecular device |
Referências
- Gu, H., O Dowd, D. K., K, D. Cholinergic synaptic transmission in Adult Drosophila Kenyon cells in situ. Journal of Neuroscience. 26, 265-272 (2006).
- Wilson, R. I., Turner, G. C., Laurent, G. Transformation of olfactory representations in the Drosophila antennal lobe. Science. 303, 366-370 (2004).
