Las grabaciones de células enteras del cerebro del adulto de Drosophila

Summary

Este video muestra el procedimiento para el aislamiento de los cerebros de los adultos Drosophila todo en la preparación para la grabación de las neuronas individuales utilizando la tecnología estándar de células enteras. Incluye imágenes de las células GFP etiquetados y las neuronas visto durante la grabación.

Abstract

En este vídeo, que muestran el procedimiento para el aislamiento de los cerebros de los adultos Drosophila todo en la preparación para la grabación de las neuronas individuales. Comenzamos con la descripción de la solución de disección y captura de las hembras adultas utilizadas en nuestros estudios. El procedimiento para la eliminación de todo el cerebro intacto, incluidos los lóbulos ópticos, se ilustra. La disección de la tráquea, que cubre también se indica. El cerebro aislado no sólo es pequeño, pero necesita un cuidado especial en el manejo en esta etapa para evitar daños a las neuronas, muchas de las cuales están cerca de la superficie exterior del tejido. Se muestra cómo un soporte especial que hemos desarrollado se utiliza para estabilizar el cerebro en la cámara de grabación. A electrofisiología estándar establecido se utiliza para la grabación de las neuronas individuales o pares de neuronas. Una imagen de fluorescencia, se ve a través del microscopio de grabación, a partir de una línea GAL4 conducir la expresión de GFP (GH146) ilustra cómo las neuronas de proyección (PN) se identifican en el cerebro en vivo. Una imagen de alta potencia Nomarski muestra una vista de una única neurona que está en la mira para la grabación de células enteras. Cuando el cerebro se elimina con éxito, sin daños, la mayoría de las neuronas se activa espontáneamente, disparando los potenciales de acción y / o exhibir la entrada sináptica espontánea. Esta en la preparación in situ, en el que se puede grabar de células enteras de neuronas identificadas en todo el cerebro combina con la manipulación genética y farmacológica, es un modelo útil para estudiar la fisiología celular y la plasticidad en el sistema nervioso central adulto.

Protocol

I. La disección del cerebro de la mosca adulta Coloque una pequeña gota (~ 100 l) de la disección de una solución en el centro de una placa de Petri de 35 mm. Captura de mujeres adultas con aspirador. Bajo microscopio de disección, se utilizan dos agujas de jeringas para decapitar a la marcha. Coloque la cabeza en una pequeña gota de solución salina de disección (con papaína es nuestro) en una placa de Petri. Posición de la cabeza con la trompa hacia abajo con el plato. …

Discussion

La preparación aislada de todo el cerebro se ilustra en este video permite la evaluación de los mecanismos celulares subyacentes a la excitabilidad y la transmisión sináptica en las neuronas identificadas, incluidas las de las vías de procesamiento olfativo en el cerebro adulto de Drosophila (Gu y Dowd O, 2006). Este enfoque es complementario al estudio de la actividad neuronal en el cerebro de un adulto intacto Drosophila (Wilson et 2004, todos), en la mayor parte de la misma manera que las grabaciones de las neuronas en una parte del…

Materials

Material Name	Tipo	Company	Catalogue Number	Comment
#5 Foceps	Tool	FST by DUMONT	No. 11251-10	Be careful, never damage the fine tips of forceps
Papain	Reagent	Worthington	3126	20 U/ml activated by 1 mM L-cysteine
Dissecting microscope	SMZ-2B Model:C-PS	Nikon		Equipped with gooseneck fiber optic lights positioned a low angle
Needle & Syringe		PrecisionGlide®?, Becton Dickinson & Co	305175 & 309602	Cheap and durable
Upright microscope	Axioskop2 FS plus	Zeiss		Equipped with a fixed stage, 40X water immersion objective, Nomarski optics, and fluorescent lamp
Patch clamp amplifier	200 B	Molecular device
Digidata D-A converter	1322A	Molecular device