खमीर कालोनी एम्बेडिंग विधि
Summary
खमीर प्रकाश और इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी के लिए सेक्शनिंग अनुमति कालोनियों को एम्बेड करने के लिए एक विधि. इस प्रोटोकॉल sporulated एक कवक समुदाय के भीतर सेल प्रकार के संगठन को समझने की ओर एक नए उपकरण प्रदान कालोनियों के भीतर और कोशिकाओं pseudohyphal कोशिकाओं के वितरण का निर्धारण की अनुमति देता है.
Abstract
भ्रूण में अलग सेल प्रकार के patterning metazoan विकास में एक महत्वपूर्ण तंत्र है. कालोनियों और biofilms जैसे सूक्ष्मजीवों के समुदाय को भी सेल प्रकार के पैटर्न प्रदर्शित करते हैं. उदाहरण के लिए, खमीर में एस cerevisiae, sporulated कोशिकाओं और pseudohyphal कोशिकाओं समान कालोनियों में वितरित कर रहे हैं. patterning और आणविक तंत्र है कि इन नमूनों को आबाद की कार्यात्मक महत्व अभी भी खराब समझ रहे हैं.
कवक कालोनियों में सेल प्रकार के पैटर्न की जांच करने के लिए सम्मान के साथ एक चुनौती है कि metazoan ऊतक के विपरीत, कालोनियों में कोशिकाओं अपेक्षाकृत कमजोर कर रहे हैं एक दूसरे से जुड़ी है. विशेष रूप से, कवक कालोनियों सबसे ऊतकों में पाया कोशिकी मैट्रिक्स के एक ही व्यापक स्तर शामिल नहीं है. यहाँ हम एम्बेडिंग और सेक्शनिंग खमीर कालोनियों कि इन कालोनियों में सेल प्रकार के आंतरिक पैटर्न से पता चलता है के लिए एक विधि पर रिपोर्ट. विधि मोटी वर्गों को तैयार (0.5 μ) प्रकाश माइक्रोस्कोपी और पतली वर्गों (0.1 μ) संचरण इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी के लिए उपयुक्त के लिए उपयोगी किया जा सकता है. एएससीआई और pseudohyphal कोशिकाओं को आसानी से प्रकाश माइक्रोस्कोपी द्वारा ovoid खमीर कोशिकाओं से प्रतिष्ठित किया जा है, जबकि इन कोशिकाओं के आंतरिक संरचना EM द्वारा visualized किया जा सकता है.
विधि अगर साथ आसपास कालोनियों, उन्हें Spurr माध्यम से घुसपैठ, और तब सेक्शनिंग पर आधारित है. 1-2 मिमी की रेंज में एक व्यास के साथ कालोनियों इस प्रोटोकॉल के लिए उपयुक्त हैं. कालोनियों के इंटीरियर visualizing अलावा, विधि है कि अंतर्निहित अगर आक्रमण कॉलोनी के क्षेत्र के दृश्य की अनुमति देता है.
Protocol
Discussion
प्रस्तुत विधि कालोनियों की आंतरिक संरचनाओं पता चलता है. क्योंकि विधि एस के एक रेंज में सेल प्रकार के पैटर्न को निर्धारित करने में प्रभावी है अलग कॉलोनी morphologies के साथ cerevisiae उपभेदों, और यह भी एक संबंध?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
अनुसंधान NIH 1R15GM094770 द्वारा वित्त पोषित किया गया था.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Osmium tetroxide | Electron Microscopy Sciences | RT 19152 | ||
| Silicone embedding molds | Fisher Scientific | NC 9975029 | ||
| Cycloaliphatic epoxide resin | Electron Microscopy Sciences | RT 15004 | ERL 4221 | |
| Epoxy resin | Electron Microscopy Sciences | RT 13000 | DER 736 | |
| Nonenyl Succinic Anhydride | Electron Microscopy Sciences | RT 19050 | NSA | |
| 2-Dimethyl aminoethanol | Electron Microscopy Sciences | RT 13300 | DMAE | |
| Mounting media | KPL | 71-00-16 | ||
| Rotating wheel | Ted Pella | Pelco 1055 | ||
| Microtome | Leica | Ultracut S |
Referências
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