Метод для встраивания дрожжей колонии позволяет срезов для световой и электронной микроскопии. Этот протокол позволяет определить распределение спорулированных клеток и pseudohyphal клеток в колонии предоставления новым инструментом на пути к пониманию организации типов клеток в течение грибковых сообщества.
Abstract
Структурирования различных типов клеток в эмбрионы является ключевым механизмом в развитии многоклеточных. Сообщества микроорганизмов, например, колоний и биопленок также отображать модели типов клеток. Например, в дрожжах S. CEREVISIAE, спорулированных клеток и pseudohyphal клетки не равномерно распределены в колониях. Функциональное значение структурирование и молекулярные механизмы, лежащие в основе этих моделей по-прежнему плохо изучены.
Одна из проблем, по отношению к исследованию моделей типов клеток в колонии грибов является то, что в отличие от многоклеточных тканей, клеток в колонии относительно слабо соединены друг с другом. В частности, грибковых колоний не содержат обширную же уровня внеклеточного матрикса в большинстве тканей. Здесь мы сообщаем о методе вложения и срезов дрожжей колонии, который показывает интерьер модели типов клеток в этих колониях. Метод может быть использован для подготовки толстым слоем (0,5 μ) полезно для световой микроскопии и тонкие срезы (0,1 μ), пригодных для просвечивающей электронной микроскопии. Сумки и pseudohyphal клетки могут легко отличить от яйцевидной дрожжевых клеток с помощью световой микроскопии, в то время как внутренняя структура этих клеток могут быть визуализированы на EM.
Метод основан на окружающих колонии с агар, проникновение их со средними Сперр, а затем секционирования. Колонии диаметром в диапазоне 1-2 мм подходят для этого протокола. В дополнение к визуализации интерьера колоний, метод позволяет выявлять области колонию, которая вторгается основной агара.
Protocol
1. Изоляция колонии и фиксация Инкубируйте 300 колоний на агаре средой для указанного времени (изолированные колонии должна быть на 1-2 мм в диаметре). Удалить колонии (лицевой стороной вверх) и подстилающей среде с помощью узкого шпателя. Место несколько капель 2% агара 42 ° …
Discussion
Метод, изложенный раскрывает внутренние структуры колоний. Потому что метод эффективен в определении структуры клеточных типов в диапазоне S. CEREVISIAE штаммов с различной морфологией колоний, а также в связанных с ними видов С. Парадоксальный 5, метод, вероятно, также работы по ш…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Исследование было профинансировано NIH 1R15GM094770.