Быстрый, надежный способ выделения жизнеспособных взрослых эпителиальных стволовых клеток из человеческой кожи описана. Метод использует ферментативного переваривания кожи матрицу коллагена, а затем выщипывание волосяных фолликулов и изоляции одного суспензии клеток или тканей фрагментов для клеточных культур.
Гомеостаз всех самообновлению тканей зависит от взрослых стволовых клеток. Как недифференцированные стволовые клетки претерпевают асимметричной отделов, они создают дочерние клетки, которые сохраняют фенотип стволовых клеток и транзита усиливающих клетки (Т. А. клетки), которые мигрируют из ниши стволовых клеток, претерпевают быстрое распространение и неизлечимо дифференцироваться в населить ткани.
Эпителиальные стволовые клетки были идентифицированы в эпидермис, волосяной фолликул, и кишечника, как клетки с высокой в пробирке пролиферативный потенциал и, как езда на велосипеде медленно этикеткой сохранив клетки в естественных условиях 1-3. Взрослый, тканеспецифические стволовые клетки отвечают за регенерацию тканей, в которых они проживают во время нормального физиологического оборота, а также во время стресса 4-5. Более того, стволовые клетки, как правило, считаются мульти-мощный, обладающий способностью приводить к нескольким типам клеток в ткани 6. Например, грызунов волосковых клеток фолликула стволовых может генерировать эпидермиса, сальных желез и волосяных фолликулов 7-9. Мы показали, что стволовые клетки из человеческой области фолликула волоса выпуклость выставке мульти-потенциальность 10.
Стволовые клетки стали ценным инструментом в области биомедицинских исследований, из-за их полезности, как в пробирке системы для изучения биологии развития, дифференциации, опухолей и для их возможной терапевтической полезности. Вполне вероятно, что взрослые стволовые клетки эпителия будут полезны в лечении таких заболеваний, как эктодермального дисплазии, monilethrix, Нетертон синдром, Менкес заболевания, наследственные эпидермолиз буллезной и alopecias 11-13. Кроме того, другие проблемы кожи, такие как ожоговых ран, хронических ран и язв извлекут выгоду из стволовых клеток, связанных лечения 14,15. Учитывая возможность перепрограммирования взрослых клеток в плюрипотентные состоянии (IPS клетки), 16,17, легко доступной и расширяемой взрослых стволовых клеток в коже человека могут предоставить ценный источник клеток для индукции и вниз по течению терапии широкого спектра заболеваний, включая сахарный диабет и болезнь Паркинсона.
Клетка добычи и культуры методов, описанных на удивление легкий и воспроизводимыми. Мы сформировали эпителиальный культур стволовых клеток из десятков лиц в широком возрастном диапазоне, включая пациентов с наследственными дефектами кожи 18. Лучше всего, чтобы начать процесс в т…
The authors have nothing to disclose.
Эта работа финансируется NIH / NCI грант R01CA-118916
Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
DMEM | GIBCO | 11995 | ||
Hams F12 | GIBCO | 11765 | ||
Fetal Bovine Serum (FBS) | GIBCO | 16000 | ||
Insulin | GIBCO | 12585 | ||
T3 | Sigma | T-2752 | ||
Transferrin | Roche | 10652202001 | ||
Hydrocortisone | Sigma | H-4001 | ||
Cholera Toxin | Sigma | C8052 | ||
Epidermal growth factor (EGF) | Sigma | E-9644 | ||
Adenine | Sigma | A9795 | ||
Trypsin(10X) | GIBCO | 15090 | ||
VERSENE | GIBCO | 15040 | ||
G418 Sulfate | Cellgro | 30-234-CR | ||
Hanks’ Balanced Salt solution | Sigma | H6648 | ||
1X PBS | Cellgro | 21-040-CV | ||
Mitomycin C | Roche | 10107409001 | ||
Penicillin/streptomycin | Invitrogen | 15140122 | ||
Dispase | Invitrogen | 17105 | ||
Crystal Violet | Fisher | C581-25 |
Keratinocyte media (KCM)
[DMEM and Ham s F12 (GIBCO, 3:1), adenine (Sigma, 180 mM), 10% fetal bovine serum (GIBCO), cholera toxin (ICN, 0.1 nM), penicillin/streptomycin (GIBCO, 100 U/ml and 100 mg/ml, respectively), hydrocortisone (Sigma, 0.4 mg/ml, 1.1 mM), T/T3 (transferrin, GIBCO, 5 μg/ml, 649 nM; and triiodo-l-thyronine, Sigma, 2 nM), insulin (Sigma, 5 mg/ml, 862 nM), and EGF (Sigma, 10 ng/ml, 1.6 nM), pH 7.2]