Clonogenic परख: पक्षपाती कक्ष
Summary
प्रजनन व्यवहार्यता का मूल्यांकन करने के लिए clonogenic परख की प्रयोज्यता 50 से अधिक वर्षों के लिए स्थापित किया गया है. यहाँ हम पक्षपाती कोशिकाओं के साथ clonogenic परख के प्रदर्शन के लिए सामान्य प्रक्रिया का प्रदर्शन.
Abstract
clonogenic परख (या कॉलोनी बनाने) 50 से अधिक वर्षों के के लिए स्थापित किया गया है, मूल तकनीक का वर्णन कागज 1 1956 में प्रकाशित किया गया था. विधि दस्तावेजीकरण के अलावा, प्रारंभिक ऐतिहासिक अध्ययन एक्स – रे विकिरणित 1 संस्कृति में स्तनधारी (HeLa) कोशिकाओं के लिए पहली विकिरण खुराक प्रतिक्रिया वक्र उत्पन्न . नियंत्रण अनुपचारित कोशिकाओं और कोशिकाओं है कि जोखिम के रूप में विभिन्न उपचार आया है के बीच, असल में, clonogenic परख (50 या अधिक कक्षों की एक बस्ती के रूप में एक एकल कोशिका यानी कोशिकाओं की क्षमता को संतान का उत्पादन) प्रजनन व्यवहार्यता में मतभेद के एक आकलन के लिए सक्षम बनाता है विकिरण, विभिन्न रासायनिक यौगिकों (जैसे साइटोटोक्सिक एजेंट) या अन्य मामलों में आनुवंशिक हेरफेर. परख विकिरण जीव विज्ञान में सबसे व्यापक रूप से स्वीकार किए जाते तकनीक बन गया है और व्यापक रूप से विभिन्न सेल लाइनों के विकिरण संवेदनशीलता का मूल्यांकन करने के लिए इस्तेमाल किया गया है. इसके अलावा, clonogenic परख आमतौर पर विकिरण संशोधित यौगिकों की प्रभावकारिता की निगरानी के लिए और कॉलोनी विभिन्न सेल लाइनों में बनाने की क्षमता है, पर साइटोटोक्सिक एजेंटों और अन्य विरोधी कैंसर चिकित्सा के प्रभाव को निर्धारित करने के लिए प्रयोग किया जाता है. एक ठेठ clonogenic अस्तित्व पक्षपाती कोशिकाओं लाइनों का उपयोग कर प्रयोग में तीन अलग – अलग 1) सेल monolayer के टिशू कल्चर बोतल में उपचार, 2 घटक) एकल कक्ष निलंबन की तैयारी और पेट्री डिश और 3 में कोशिकाओं का एक उचित संख्या चढ़ाना) शामिल कालोनियों फिक्सिंग और धुंधला हो जाना एक प्रासंगिक ऊष्मायन अवधि के बाद, जो 1-3 सप्ताह से सेल लाइन पर निर्भर करता है, रेंज सकता है. यहाँ हम एक अमर मानव keratinocyte सेल लाइन का उपयोग (FEP-1811) 2 के साथ पक्षपाती सेल लाइनों के साथ clonogenic परख प्रदर्शन के लिए सामान्य प्रक्रिया का प्रदर्शन. इसके अलावा, हमारे उद्देश्य के लिए चढ़ाना और विकिरण के कक्षों के प्रदर्शन के बाद दक्षता भिन्न अस्तित्व की गणना सहित clonogenic assays के आम सुविधाओं का वर्णन है, और एक प्राकृतिक एंटीऑक्सीडेंट के निर्माण के उपयोग के साथ विकिरण प्रतिक्रिया के संशोधन का उदाहरण देना हैं.
Protocol
Discussion
इस उदाहरण में विभिन्न सांद्रता के साथ मानव FEP 1811 – keratinocytes इलाज किया गया 100 μg / एमएल सीपीएफ़, डेटा 1 घंटे के लिए 20 μg / एमएल सीपीएफ़ 37 डिग्री सेल्सियस के लिए दिखाया गया है बाद उपचार कोशिकाओं 4 137 Cs स्रोत (, Nordion इंटरने…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
परमाणु विज्ञान और इंजीनियरिंग के ऑस्ट्रेलियाई संस्थान का समर्थन स्वीकार किया है. TCK AINSE पुरस्कार के प्राप्तकर्ता था. Epigenomic चिकित्सा लैब राष्ट्रीय स्वास्थ्य और ऑस्ट्रेलिया के चिकित्सा अनुसंधान परिषद (566,559) द्वारा समर्थित है. एचआर स्नातकोत्तर ऑस्ट्रेलियाई और BakerIDI उज्ज्वल चिंगारी पुरस्कार द्वारा समर्थित है. इस काम बायोमेडिकल इमेजिंग विकास (सीआरसी बोली) लिमिटेड की स्थापना की है और ऑस्ट्रेलियाई सरकार ने सहकारी अनुसंधान केन्द्र कार्यक्रम के अंतर्गत समर्थित के लिए सीआरसी द्वारा वित्त पोषित है. सीओ प्राप्तकर्ता एक ऑस्ट्रेलियाई पुरस्कार स्नातकोत्तर और एक अनुपूरक सीआरसी बोली छात्रवृत्ति है.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Keratinocyte-serum free medium | Growth medium | Invitrogen | 17005042 | Supplemented with 2mM L-glutamine, 20μg/ml gentamicin, epidermal growth factor, bovine pituitary extract. |
| Trypsin-EDTA | Invitrogen | 15400-054 | 0.05% trypsin / EDTA to detach adherent cells; 10 x stock diluted in PBS w/o Ca2+/Mg2+. | |
| Dulbecco’s modified essential medium | Growth medium | Invitrogen | 11885-084 | Supplemented with 10% FBS and 20μg/ml gentamicin; used to neutralise trypsin/EDTA. |
| 0.09% Saline | Solution | Used to wash colonies. | ||
| 10% Neutral buffered formalin solution | Solution | Sigma-Aldrich | HT501128 | ~4% formaldehyde; used to fix colonies. |
| Crystal violet | Powder | SPI-Chem | 02577-MB | 0.01% crystal violet solution, prepared in dH2O, used to stain colonies. |
| Gammacell 1000 elite irradiator | Nordion International Inc. | |||
| Petri dishes | 60 x 15 mm | Falcon | 353002 | |
| Haemocytometer | Hawksley; Medical and Laboratory Equipment | AC1000 | ||
| Cloning box | Plastic box with holes punched at opposite sides of lid; for storing petri dishes during prolonged incubation for colony formation. | |||
| Stereomicroscope | Type 102 | Nikon | Used to count colonies consisting of >50 cells. |
Referências
- Puck, T. T., Marcus, P. I. Action of x-rays on mammalian cells. J Exp Med. 103, 653-666 (1956).
- Hurlin, P. J. Progression of human papillomavirus type 18-immortalized human keratinocytes to a malignant phenotype. Proc Natl Acad Sci U S A. 88, 570-574 (1991).
