Time-lapse immagini dal vivo di relazione clonale cellule progenitrici neurali in via di sviluppo Zebrafish proencefalo
Summary
Il video presente mostra un metodo che sfrutta la combinazione di elettroporazione e microscopia confocale per eseguire l'imaging in diretta su singole cellule progenitrici neurali nel proencefalo zebrafish via di sviluppo.<em> In vivo</em> Analisi dello sviluppo delle cellule progenitrici neurali proencefalo a livello clonale può essere raggiunto in questo modo.
Abstract
Schemi precisi di divisione, migrazione e differenziazione delle cellule progenitrici neurali sono cruciali per il corretto sviluppo del cervello e 1,2 funzione. Per capire il comportamento delle cellule progenitrici neurali nel complesso in un ambiente vivo, time-lapse immagini dal vivo delle cellule progenitrici neurali in un cervello intatto è criticamente necessaria. In questo video, sfruttiamo le caratteristiche uniche di embrioni di zebrafish per visualizzare lo sviluppo delle cellule progenitrici neurali proencefalo in vivo. Noi usiamo per elettroporazione geneticamente e scarsamente etichetta singole cellule progenitrici neurali. In breve, il DNA che codifica per i costrutti marcatori fluorescenti sono stati iniettati nel ventricolo proencefalo di 22 ore dopo la fecondazione (HPF) embrioni di zebrafish e impulsi elettrici sono stati consegnati immediatamente. Sei ore più tardi, gli embrioni di zebrafish elettroporate sono stati montati con agarosio a basso punto di fusione in fondo la cultura piatti di vetro. Fluorescente cellule progenitrici neurali sono state poi ripreso per 36 ore con intervalli fissi al microscopio confocale utilizzando lenti dell'obiettivo acqua immersione. L'attuale metodo fornisce un modo per acquisire conoscenze nel vivo nello sviluppo delle cellule progenitrici neurali proencefalo e può essere applicato ad altre parti del sistema nervoso centrale dell'embrione zebrafish.
Protocol
Discussion
In questo video, si dimostra un metodo per time-lapse immagini dal vivo di cellule progenitrici neurali a livello clonale nel proencefalo zebrafish via di sviluppo. Abbiamo testato e modificato i protocolli esistenti elettroporazione 4-6 a geneticamente e fluorescente etichetta singole cellule progenitrici neurali. Un albero lignaggio composto da cellule progenie clonale relativi possono essere stabiliti dal momento che solo poche cellule sono state scarsamente etichettati con un voltaggio relativamente basso…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Questo lavoro è stato sostenuto da theNIH grantNS042626. Ringraziamo Thorn Kurt e UCSF Nikon Imaging centro per l'assistenza con l'imaging.
Referências
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