Finger-stick Méthode d'échantillonnage de sang pour la détermination des induite par l'exercice apoptose des lymphocytes
Summary
L'exercice est capable d'induire l'apoptose dans les cellules immunitaires. Il ya des limites de mesure différents, notamment relatives à la quantité de temps requise pour isoler et traiter un échantillon de sang avant l'évaluation. Démontrée est une procédure rapide et peu invasive pour l'analyse de l'exercice apoptose induite par des lymphocytes.
Abstract
L'exercice est un stimulus physiologique capable d'induire l'apoptose dans les cellules immunitaires. À ce jour, diverses limitations ont été identifiées à la mesure de ce phénomène, notamment relatives à la quantité de temps requise pour isoler et traiter un échantillon de sang avant l'évaluation de la mort cellulaire. Pour cette raison, il est difficile de déterminer si les augmentations signalées dans l'apoptose des cellules immunitaires peut être contribué à l'effet réel de l'exercice sur le système, ou sont un reflet de l'époque et le traitement nécessaire pour obtenir finalement cette mesure. Dans cet article, nous démontrons une procédure rapide et peu invasive pour l'analyse de l'exercice apoptose induite par des lymphocytes. Contrairement à d'autres techniques, le sang total est ajouté à un panel d'anticorps immédiatement après l'obtention d'un échantillon. Après la période d'incubation, les globules rouges sont lysés et les échantillons sont prêts à être analysés. L'utilisation d'une procédure d'échantillonnage doigt bâton réduit le volume de sang nécessaire, et minimise l'inconfort pour les sujets.
Protocol
Discussion
Un exemple de procédure minimalement invasive collecte et l'analyse subséquente est démontrée pour l'analyse des phases précoces et tardives de l'exercice apoptose induite par des lymphocytes. Il est également possible d'exclure clairement de ces cellules, qui sont nécrosées, et non apoptotiques. Cette procédure permet de surmonter les inconvénients et l'inconfort associés à la ponction veineuse invasif de la région du coude à plusieurs moments, avant, pendant et immédiatement après l…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Cette recherche a été soutenu par une subvention aux nouveaux professeurs de la Faculté au Conseil des bourses Western Kentucky University.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Flow Cytometry Binding Buffer | eBioscience | 00-4222-26 | ||
| RBC Lysis Buffer | eBioscience | 00-4333-57 | ||
| Lancet Device | Accu Check Soft Touch | Roche Diagnostics Corp. | ||
| Capillary tubes | Heparinized Capillary Tubes | Chase Scientific Glass, Inc. | 501 | |
| Centrifuge | GmC Lab | Gilson | PMS-880 | |
| Annexin V-FITC Conjugated | Biovision Inc. | K201-400-1 | ||
| CD4-PE Conjugated | Anti-human, clone RPA-T4 | eBioscience | 12-0049-42 | |
| CD8-PE Conjugated | Anti-human, clone OKT8 | eBioscience | 12-0086-73 | |
| CD19-PE Conjugated | Anti-human, clone HIB19 | eBioscience | 12-0199-42 | |
| 7-AAD Viability Staining Solution | eBioscience | 00-6993-50 | ||
| CD45RA-APC Conjugated | Anti-human, clone HI100 | eBioscience | 17-0458-42 | |
| Flow cytometer | C6 | Accuri |
Referências
- Simpson, R. J., Florida-James, G. D., Whyte, G. P., Black, J. R., Ross, J. A., Guy, K. Apoptosis does not contribute to the blood lymphocytopenia observed after intensive and downhill treadmill running in humans. Res. Sports Med. 15, 157-174 (2007).
- Steensberg, A., Morrow, J., Toft, A. D., Bruunsgaard, H., Pedersen, B. K. Prolonged exercise, lymphocyte apoptosis and F2-isoprostanes. Eur. J. Appl. Physiol. 87, 38-42 (2002).
- Mooren, F. C., Bloming, D., Lechtermann, A., Lerch, M. M., Völker, K. Lymphocyte apoptosis after exhaustive and moderate exercise. J. Appl. Physiol. 93, 147-153 (2002).
- Peters, E. M., Eden, M. V. a. n., Tyler, N., Ramautar, A., Chutergoon, A. A. Prolonged exercise does not cause lymphocyte DNA damage or increased apoptosis in well-trained endurance athletes. Eur. J. Appl. Physiol. 98, 124-131 (2006).
- Wang, J. -. S., Huang, Y. -. H. Effects of exercise intensity on lymphocyte apoptosis induced by oxidative stress in men. Eur. J. Appl. Physiol. 95, 290-291 (2005).
- Mooren, F. C., Lechtermann, A., Völker, K. Exercise-induced apoptosis of lymphocytes depends on training status. Med. Sci. Sports Exerc. 36, 1476-1483 (2004).
- Navalta, J. W., Sedlock, D. A., Park, K. -. S. Blood treatment influences the yield of apoptotic lymphocytes after maximal exercise. Med. Sci. Sports Exerc. 37, 369-373 (2005).
