इस वीडियो में हम एक प्रोटोकॉल के लिए माउस thymic लिंफोमा सेल लाइनों की स्थापना प्रदर्शित करता है. और p53 / – thymic लिंफोमा के साथ चूहों इस प्रोटोकॉल का अनुसरण करके, हम सफलतापूर्वक एटीएम / से कई टी सेल लाइनों की स्थापना की है.
स्थापित सेल लाइनों एक महत्वपूर्ण अनुसंधान उपकरण है कि अनुसंधान में प्रयोगशाला पशुओं के उपयोग को कम कर सकते हैं. , जैसे एटीएम आनुवंशिक रूप से संशोधित चूहों के कुछ उपभेदों – / – और p53 – / – लगातार thymic लिंफोमा 1,2 जीवन में जल्दी विकसित करने, और इस प्रकार, murine टी सेल लाइनों की व्युत्पत्ति के लिए एक विश्वसनीय स्रोत के रूप में सेवा कर सकते हैं. यहाँ हम के रूप में पिछले 1,3 प्रोटोकॉल में वर्णित interleukins जोड़ने की जरूरत के बिना में स्थापित murine thymic लिंफोमा टी सेल लाइनों के विकास के लिए एक विस्तृत प्रोटोकॉल उपस्थित थे. ट्यूमर तीन से छह महीने के आयु वर्ग के चूहों से काटा गया, hunched मुद्रा के अवलोकन के आधार पर दिखाई ट्यूमर के जल्द से जल्द संकेत पर, श्वास, गरीब संवारने और एक अतिसंवेदनशील तनाव 1,4 में बर्बाद कर अस्वाभाविक. / – – [FVB/N- एटीएम tm1Led / जम्मू] 2 और p53 – / – [129/S6- Trp53 tm1Tyj / जम्मू] 5 चूहों हम सफलतापूर्वक इस प्रोटोकॉल का उपयोग कर कई टी सेल लाइनों और एटीएम की जन्मजात उपभेदों की स्थापना की है. हम आगे दिखाना है कि टी सेल स्थापित जनसंख्या के 90% से अधिक CD3 सीडी 4, और CD8 व्यक्त. लगातार stably स्थापित सेल लाइनों के साथ, वर्तमान प्रोटोकॉल का उपयोग करके उत्पन्न टी कोशिकाओं को एक वर्ष से अधिक के लिए किया गया passaged है.
इस प्रोटोकॉल में, हम दो अलग माउस जीनोटाइप से murine टी सेल लाइनों की स्थापना, एटीएम / – [FVB/N- एटीएम tm1Led / जम्मू] और p53 – / के लिए विस्तृत प्रक्रियाओं प्रदान करते हैं – [129/S6- Trp53 / tm1Tyj जम्?…
The authors have nothing to disclose.
The authors wish to thank Dr. Boris Reizis from the Department of Microbiology and Immunology at Columbia University for helpful discussions. We also wish to thank Dr. Margaret Bynoe, Dr. Rodman Getchell and Deequa Mahamed from the Department of Microbiology and Immunology at the College of Veterinary Medicine, Cornell University for technical assistance with flow cytometry and Lu Huang for assistance with video editing. The authors also wish to thank the members of Duhamel and Weiss laboratories for their critical review of the manuscript and video production, and Stephanie Yazinski from the Weiss laboratory for breeding and genotyping p53-/- mice. Experiments on animals were performed in accordance with the guidelines and regulations set forth by Cornell University Institutional Animal Care and Use Committee. This research was supported in part by funds provided by the US Department of Agriculture, Cooperative State Research, Education, and Extension Service, Animal Health and Disease Research Program (to G.E.D. and R.S.W.) and NIH grants R03 HD058220 and R01CA108773 (to R.S.W). The video was produced using in-house facilities by the personnel from the Duhamel & Weiss laboratories.