Biolumineszenz-Bildgebung für die Beurteilung von Immunantworten nach der Implantation von Engineered Heart Tissue (EHT)
Summary
Dieses Video demonstriert die Verwendung von<em> In vivo</em> Biolumineszenz-Bildgebung zu Immunreaktionen nach Implantation von Engineered Heart Tissue (EHT) in Ratten zu untersuchen.
Abstract
Verschiedene Techniken der kardialen Tissue Engineering haben in den vergangenen Jahrzehnten auch Gerüste Strategien entweder nativ oder bioartifiziellen Gerüstmaterial, Einschluss von Herzmuskelzellen in Hydrogele wie Fibrin oder Kollagen und Stapeln von Myozyten Monoschichten dem 1. verfolgt. Diese Konzepte zielen auf die Wiederherstellung der Herzfunktion (z. B. nach Myokardinfarkt) oder als experimentelle Modelle (zB zur prädiktiven Toxikologie und Wirkstoff-Screening oder Krankheit Modellierung). Präzise Überwachung der das Überleben der Zelle nach Implantation von Engineered Heart Tissue (EHT) ist inzwischen möglich, mit in-vivo Biolumineszenz-Bildgebung (BLI) Techniken 2. Hier beschreiben wir die Erzeugung von Fibrin-basierten EHT aus einem transgenen Ratten-Stamm mit ubiquitäre Expression von Luciferase (ROSA / Luciferase-LEW Tg, 3). Die Implantation ist in das große Netz verschiedener Zuchtlinien, um Immunreaktionen des Empfängerorganismus folgenden EHT Implantation beurteilen durchgeführt. Ein Vergleich der Ergebnisse von BLI und die Enzyme Linked Immuno Spot Technique (ELISPOT) bestätigen die Verwendbarkeit von BLI für die Beurteilung der Immunantwort generiert.
Protocol
Discussion
Bevor klinische Umsetzung der EHT-Technologie für die Herz-Reparatur, müssen grundlegende Fragen wie die Immunogenität der beiden Mobilfunk-und Matrix-Komponenten oder Transplantat-Überlebens nach der Implantation in experimentellen Modellen bewertet werden. In-vivo-Biolumineszenz-Bildgebung stellt eine nützliche neue Technik für die Überwachung der das Überleben der Zelle nach der Transplantation . Wir haben erfolgreich Fibrin-basierten EHT generiert mit Luciferase positive (luc +) Herzzellen durch Anp…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Sonja Schrepfer, Lenard Conradi und Arne Hansen erhielt finanzielle Unterstützung von der Deutschen Forschungsgemeinschaft (DFG; SCHR992/3-1, SCHR992/4-1, CO 858/1-1, HA 3423/3-1). Die Arbeit wurde auch durch Zuschüsse der Europäischen Union zu Thomas Eschenhagen (EUGeneHeart und Angioscaff) unterstützt.
Materials
- LEW-Tg(Gt(ROSA)26Sor-luc)11Jmsk rats (NBPR rat number 0299, http://www.anim.med.kyoto-u.ac.jp/NBR/)
- Bovine fibrinogen (stock solution: 200 mg/ml plus aprotinin 5 μg/ml fibrinogen in NaCl 0.9%, Sigma F4753)
- Matrigel (BD Bioscience 356235)
- DMEM (Biochrome F0415)
- Horse serum (Gibco 26050)
- Penicillin/streptomycin (Gibco 15140)
- Insulin (Sigma-Aldrich I9278)
- Aprotinin (Sigma Aldrich A1153)
- d-Luciferin (Biosynth L-8220)
- Enzyme-linked immunosorbent spot (ELISpot) assay plates (Hassa Laborbedarf, S2EM004M99)
Referências
- Eschenhagen, T., Zimmermann, W. H. Engineering myocardial tissue. Circ Res. 97, 1220-1231 (2005).
- van der Bogt, K. E., Schrepfer, S., Yu, J. Comparison of transplantation of adipose tissue- and bone marrow-derived mesenchymal stem cells in the infarcted heart. Transplantation. 87, 642-652 (2009).
- Hakamata, Y., Murakami, T., Kobayashi, E. “Firefly rats” as an organ/cellular source for long-term in vivo bioluminescent imaging. Transplantation. 81, 1179-1184 (2006).
- Hansen, A., Eder, A. Development of a Drug Screening Platform Based on Engineered Heart Tissue. Circ Res. , (2010).
