की पहचान के लिए एक 1.5 घंटो प्रक्रिया Enterococcus प्रजाति सीधे रक्त संस्कृतियों से
Summary
स्वस्थानी संकरण परख में फ्लोरोसेंट एक पेप्टाइड न्यूक्लिक एसिड (PNA मछली) का उपयोग कर एक सकारात्मक रक्त संस्कृति से Enterococcus faecalis और अन्य Enterococcus प्रजातियों के प्रत्यक्ष पहचान के लिए एक तेजी से प्रोटोकॉल.
Abstract
Enterococci ई. साथ bacteremia का एक आम कारण हैं faecalis प्रमुख ई. faecium द्वारा पीछा प्रजातियों जा रहा है. क्योंकि एम्पीसिलीन और ई. में vancomycin प्रतिरोध faecalis अभी भी असामान्य है ई. faecium में प्रतिरोध की तुलना में, तेजी से enterococcal प्रजातियों के बीच भेदभाव की अनुमति परीक्षण के विकास उपयुक्त चिकित्सा और प्रतिरोध निगरानी के लिए महत्वपूर्ण है. ई. faecalis ँ PNA मछली परख (AdvanDx, Woburn, एमए) स्वस्थानी संकरण प्रारूप में प्रजातियों विशिष्ट पेप्टाइड न्यूक्लिक एसिड (PNA) एक प्रतिदीप्ति में जांच का उपयोग करता है और 1.5 घंटे और प्रजाति विशेष के लिए महत्वपूर्ण जानकारी प्रदान करने की क्षमता के परिणाम के लिए एक समय प्रदान करता है है उपचार. Multicenter अध्ययन के लिए 1.5 घंटे ई. के प्रदर्शन का आकलन करने के लिए प्रदर्शन किया गया / faecalis ँ PNA मछली प्रक्रिया मूल 2.5 घंटे परख प्रक्रिया और enterococci का एक सकारात्मक रक्त संस्कृति बोतल से सीधे पहचान के लिए मानक जीवाणु तरीकों की तुलना में.
Protocol
Discussion
ई. enterococcus के लिए / faecalis ँ PNA मछली परख पहचान मानक संस्कृति तरीकों की तुलना में 2-3 दिन पहले प्रदान कर सकते हैं. परख के लिए छोटा प्रक्रिया (1.5 hourr) तेजी से पहचान की है कि रोगाणुरोधी चिकित्सा और रोगी परिणाम के लिए एक बेहतर दृष्टिकोण के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है प्रदान करता है. एक अध्ययन करने के लिए इस समर्थन फॉरेस्ट, एट अल. (6) द्वारा किया गया था. 2005 में शुरुआत लगातार दो वर्षों में सूक्ष्म जीव विज्ञान प्रयोगशाला जोड़े और जंजीरों में ग्राम सकारात्मक cocci पहचान विधियों द्वारा पारंपरिक सूक्ष्मजीवविज्ञानी रक्त संस्कृति की बोतलों में बढ़ रही है और 2006 में ई. जोड़ने / faecalis ँ PNA मछली. इसके अलावा एक उपचार संस्थानों रोगाणुरोधी टीम (AMT) द्वारा विकसित एल्गोरिथ्म के प्रभावी ढंग से PNA मछली समय पर ढंग से प्रयोगशाला द्वारा उत्पन्न डेटा का उपयोग करने के लिए. प्राथमिक मूल्यांकन परिणाम था रक्त संस्कृति से समय से पहले प्रभावी antimicrobial उपचार के कार्यान्वयन के लिए आकर्षित और बाद PNA मछली प्रयोगशालाओं वर्कफ़्लो में स्थापित किया गया था. बीमारी, रोगी स्थान और अनुभवसिद्ध रोगाणुरोधी चिकित्सा की गंभीरता को मापा गया. Bacteremia enterococcal अधिग्रहीत अस्पताल के साथ 224 रोगियों की कुल पूर्व हस्तक्षेप की अवधि में और 129 PNA मछली अवधि में 95 के साथ मूल्यांकन किया गया. PNA मछली ई. पहचान faecalis 3 पारंपरिक संस्कृतियों (1.1 बनाम 4.1 दिनों, पी <0.001) से पहले के दिनों. PNA मछली ई. faecium एक औसत 2.3 दिनों पहले पहचान (1.1 बनाम 3.4 दिनों, <.001 पी) और किया गया था करने के लिए प्रभावी उपचार (1.3 बनाम 3.1 दिनों, 0.001 <पी) की शुरुआत समय में सांख्यिकीय महत्वपूर्ण कटौती के साथ जुड़ा हुआ है और 30 दिन कम मृत्यु दर (26% बनाम 45%, पी = 0.04). इस समूह ने निष्कर्ष निकाला है कि ई. एक AMT उपचार एल्गोरिथ्म के साथ संयोजन के रूप में / faecalis ँ PNA मछली परख ई. faecium अधिग्रहीत bacteremia अस्पताल के साथ रोगियों के लिए उपयुक्त अनुभवसिद्ध रोगाणुरोधी चिकित्सा के पहले दीक्षा में हुई .
- अभिकर्मकों के बाद समाप्ति तिथियाँ लेबल और अभिकर्मकों पर मुद्रित किसी भी तरह से संशोधित नहीं किया जाना चाहिए नहीं किया जाना चाहिए. वे उपयोग में नहीं है जब रेफ्रिजरेटर में रह सकता है या वे शक्ति खो सकता है चाहिए.
- रक्त संस्कृति की बोतलें नमूने से पहले मिलाया जाना चाहिए.
- यह महत्वपूर्ण है क्योंकि यह स्लाइड्स के बीच सामग्री के पार संदूषण के कारण, हो सकता है या अभिकर्मक के संदूषण के कारण की अनुमति नहीं dropper बोतल टिप को छूने के लिए एक रक्त धब्बा.
- सुनिश्चित करें कि पानी स्नान और हीटिंग ब्लॉक निरंतर डिग्री सेल्सियस 55 पर बनाए रखा जाता है
- दोहरी बैंड फ़िल्टर या रंग स्पष्ट रूप से discerned नहीं किया जाएगा के अलावा अन्य मौजूद फिल्टर्स का इस्तेमाल मत करो.
- खुर्दबीन माइक्रोस्कोप स्लाइड्स या संकरण है घटित नहीं होगा की तुलना में अन्य स्लाइड्स का उपयोग नहीं है.
- यह महत्वपूर्ण है कि खुर्दबीन ठीक से कार्य कर रहा है. सुनिश्चित करें कि खुर्दबीन बल्ब उपयोग के लिए घंटे की स्वीकृत संख्या के भीतर है.
- कुछ दुर्लभ घटनेवाला Enterococcus प्रजातियों PNA जांच ई. asinii, E.dispar, ई. haemoperoxidus, ई. cecorum, ई. columbae, ई. saccharolyticus, ई. solitarius और ई जैसे अन्य Enterococcus प्रजातियों, hybridizing द्वारा पता नहीं sulfurous.
- ई. moraviensis ई. के रूप में पहचान की है अनुक्रम समानता के कारण faecalis.
- स्ट्रैपटोकोकस anginosus के कुछ उपभेदों एक झूठी हरी सकारात्मक अनुक्रम समानता के कारण प्रतिदीप्ति उत्पादन.
- VersaTREK रक्त संस्कृति बोतलें नैदानिक अध्ययन के दौरान मूल्यांकन किया गया. ई. का पता लगाने के प्रदर्शन faecalis और अन्य Enterococcus एसपीपी. VersaTREK रक्त संस्कृति बोतलें के साथ अज्ञात है.
- झूठी सकारात्मक हरी autofluorescence अगर एक मानक FITC फ़िल्टर दोहरी बैंड फ़िल्टर के बजाय प्रयोग किया जाता है हो सकता है.
- झूठी नकारात्मक परिणामों कभी कभी मिश्रित वृद्धि के कारण है या परख तकनीक में त्रुटि के कारण हो सकता है.
- और उपकरण इस्तेमाल के प्रकार की स्थिति प्राप्त छवि के दृश्य उपस्थिति को प्रभावित करेगा. प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप के प्रकार कार्यरत हैं, प्रकाश स्रोत और कोशिकाओं में rRNA के स्तर के लिए varydue सकता है
- ठोस मीडिया पर अलगाव के अन्य जीवों के साथ मिश्रित विकास को अंतर और सकारात्मक रक्त एक नकारात्मक परिणाम उपज संस्कृतियों की पहचान की जरूरत है.
- उत्पाद रक्त संस्कृतियों की तुलना में अन्य नमूनों के साथ नहीं किया गया पुष्टि की है.
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
अध्ययन AdvanDx द्वारा प्रायोजित किया गया.
Materials
Reagents
E. faecalis/OE PNA FISH is comprised of the following kit components:
- Fixation Solution Fixation Solution 3 mL phosphate-buffered saline with detergent.
- E. faecalis/OE PNA E. faecalis/OE PNA 1.5 mL PNA probes in hybridization. solution. Contains 30% formamide.
- 60x Wash Solution 60x Wash Solution 50 mL Tris-buffered saline with detergent
- Mounting Medium Mounting Medium 3 mL photobleaching inhibitor in Glycerol
- Quality control slides
- AdvanDX
Referências
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