Questo articolo descrive un metodo per isolare elettrofisiologico stimolazione chimica per i singoli sensilli via extracellulare, in punta di registrazioni in olio minerale.
Descriviamo una modifica di una esistente punta-registrazione 1,2 tecnica elettrofisiologico per indagare breve, come il peg-sensoriale sensilli 3,4. Sulla revisione a medio ventrale superficie di tutti gli scorpioni sono due appendici chiamate pectine, che hanno campi densi di meccano-e chemosensoriali peg sensilli 5,6. Un metodo per la valutazione chemoresponsiveness di questi sensilli utilizza un elettrodo di tungsteno per extracellulare registrare l'attività neurale all'interno di un sensillum come odorizzante volatile è introdotto nel campo sensoriale 5,7. I limiti di questo metodo sono lento i dati raccolti e stimolante introduzione incontrollata di, e la rimozione da, il campo piolo. Per superare questi limiti, abbiamo sviluppato una nuova punta-registrazione tecnica che utilizza l'olio minerale non polare come un mezzo attraverso il quale fornire a base d'acqua tastants a singoli peg sensilli 8,9. Noi abbiamo applicato con successo questo metodo per ottenere chemoresponses sensillar di acido citrico, etanolo, e sale. Qui descriviamo il protocollo sperimentale per uno studio 9. Pensiamo che questo nuovo metodo può essere utile per lo studio delle proprietà di risposta di altri sistemi artropodi chemosensoriali, compresi quelli degli insetti 10, 11 e crostacei 12.
Il protocollo sopra descritto come preparare un deserto prateria scorpione (Paruroctonus utahensis) per lo studio elettrofisiologico. In particolare, si mostra come costruire una camera di controllo extracellulare punta-registrazioni di pectinal neuroni chemosensoriali sott'olio. Perché l'olio e l'acqua non si mescolano, è possibile isolare stimolazione chimica (con acqua a base di stimolanti) per sensilli singoli. Va sottolineato che P. utahensis, è un animale relativamente piccolo (≈ 2,5-5 cm) e l'applicazione di questo protocollo per animali più grandi dimensioni possono richiedere un aggiustamento molti, come le dimensioni della piattaforma dell'animale, da camera, e la quantità di olio applicato. Si consiglia la realizzazione di studi pilota per testare la minima quantità di olio necessario per la consegna controllata a base d'acqua stimolanti chimici.
Inoltre, abbiamo riscontrato alcun effetto di olio sulla linea di base dell'attività neurale all'interno pectinal sensilli 8. Questo dovrebbe essere confermata per sistemi modello anche altri, prima di valutare chemoresponsiveness.
Questo metodo può essere utilizzato in combinazione con un altro metodo per testare gli effetti di interazione tra chemoresponse sensilli nel campo sensoriale. Per esempio, è possibile punta di record (in olio) da un sensillum come base-record (tramite un elettrodo di tungsteno) da un sensillum vicina 9. Tale configurazione di registrazione possono essere utilizzati per valutare anche di costituzione chimica stimolante sensillum influenza l'attività neurale della base-registrato sensillum. Ad oggi, nessuno ha testato questa per pectinal sensilli scorpione, e resta una questione aperta per gli altri sistemi chemosensoriali pure.
Per riassumere, pensiamo che la punta di registrazione metodo del petrolio sotto i progressi nel campo di applicazione indagini elettrofisiologiche nelle basi neurali di gustazione artropodi. In questo manoscritto, mettiamo a disposizione un protocollo per la preparazione degli animali per questo metodo, e speriamo che fornisce una solida base per ulteriori studi di sistemi sensoriali nervoso periferico.
The authors have nothing to disclose.
Ringraziamo il fondo di Vita, Università di Oklahoma Undergraduate Research Program Opportunità, e il Dipartimento di Zoologia per finanziare questo lavoro. Ringraziamo anche il Dott. Hoefnagels Marielle aiuto editoriale.
Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
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Lift-N-Press tab | Ted Pella, Inc. | 16082 | Doubled-sided adhesive | |
MicroFil | World Precision Instruments, Inc. | MF34G | Micropipette filler | |
Standard Glass Capillaries | World Precision Instruments, Inc. | 1B100F-6 | Glass pipettes | |
Microelectrode Holder | World Precision Instruments, Inc. | MEH3SBW10 |