दो photon इमेजिंग बेसल शर्तों के तहत लसीका नोड के भीतर और एक प्रतिरक्षा 1 प्रतिक्रिया के दौरान लिम्फोसाइट गतिशीलता और सेलुलर बातचीत पर्दाफाश किया है. यहाँ, हम टी कोशिकाओं, लिम्फ नोड्स के अलगाव, इमेजिंग और सीडी 4 की गतिशीलता + explanted लिम्फ नोड में टी कोशिकाओं की दत्तक हस्तांतरण प्रदर्शित करता है.
दो photon इमेजिंग बेसल शर्तों के तहत लसीका नोड के भीतर और एक एक प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया की दीक्षा गतिशीलता और सेलुलर बातचीत के एक सुरुचिपूर्ण नृत्यकला से पता चला है . यहाँ, हम लेबल टी कोशिकाओं, लिम्फ नोड्स के अलगाव, इमेजिंग और सीडी 4 की गतिशीलता + explanted लसीका नोड के रूप में पहली बार 2 2002 में वर्णित में टी कोशिकाओं के दत्तक हस्तांतरण के लिए तरीके प्रस्तुत करते हैं. प्रतिरक्षा कोशिकाओं के दो photon इमेजिंग की आवश्यकता है कि कोशिकाओं fluorescently लेबल रहे हैं या तो एक सेल tracker डाई के साथ धुंधला हो जाना या एक फ्लोरोसेंट प्रोटीन व्यक्त की. हम कोशिकाओं को इंजेक्शन के दत्तक हस्तांतरण प्रक्रिया में दाता चूहों से ली गई एक प्राप्तकर्ता जानवर की पूंछ नस, जहां वे लगभग 15-30 मिनट के भीतर lymphoid अंगों को घर. प्रदर्शित हम एक लसीका नोड के अलगाव को वर्णन और विधियों का वर्णन करने के लिए excised लिम्फ नोड के उचित बढ़ते सुनिश्चित. Perfused मीडिया, तापमान, और लेसर शक्ति के समुचित oxygenation जैसे अन्य कारणों पर विचार – विमर्श कर रहे हैं. अंत में, हम भोले CD4 के 3D वीडियो छवियों + टी कोशिकाओं 37 पर स्थिर राज्य गतिशीलता प्रदर्शन मौजूद डिग्री सेल्सियस
इस वीडियो प्रोटोकॉल में हम दत्तक सेल हस्तांतरण और लसीका नोड अलगाव और इमेजिंग एक परिधीय लसीका नोड में लिम्फोसाइट गतिशीलता के लिए आवश्यक तैयारी के लिए प्रक्रियाओं दिखा. दो photon इमेजिंग दोनों explanted ऊतकों (यहाँ दिखाया गया है) में और intravital तैयारी में confocal इमेजिंग पर कई फायदे हैं. विशेष रूप से, इन्फ़रा लाल उत्तेजना का उपयोग प्रकाश बिखरने minimizes और लिम्फ नोड के कैप्सूल नीचे ~ इमेजिंग 300 micrometers के लिए अनुमति देता है और कुछ 4 ऊतकों में गहरे. इसके अलावा, बहु photon उत्तेजना उद्देश्य के केन्द्र बिन्दु के लिए प्रतिबंधित है, विरंजन फ़ोटो और फोकल हवाई जहाज़ की ओर बाहर ऊतकों को नुकसान कम से कम. किसी भी नई तकनीक के साथ के रूप में, तथापि, दो photon इमेजिंग एक रामबाण नहीं है अपनी सीमाओं और संभावित नुकसान के 5 दिमाग में रखा जाना चाहिए. कोलेजन ब्याज की कोशिकाओं द्वारा दूसरी हार्मोनिक पीढ़ी के रूप में में आंतरिक संकेतों को छोड़कर fluorescently बाह्य जांच या फ्लोरोसेंट प्रोटीन की अभिव्यक्ति द्वारा लेबल होना चाहिए कि इनमें आवश्यकता है. छाप इस तरह बनाया है कि इन कोशिकाओं लेबल को एक काले शून्य में तैर रहे हैं, जबकि सच में वे डूब रहे हैं, और संरचनात्मक तत्वों और असंख्य अन्य unlabeled, अदृश्य कोशिकाओं की एक जटिल पर्यावरण के साथ बातचीत.
दो photon इमेजिंग के इम्यूनोलॉजी शुरूआत के बाद से छह वर्षों में, इस तकनीक शोधकर्ताओं की अनुमति दी गई है बरकरार रहने वाले सेल सेल बातचीत, सेल गतिशीलता और स्थानीयकरण, सेलुलर संकेत दे रास्ते और साइटोटोक्सिक सेल सहित ऊतकों प्रक्रियाओं में सीधे visualizing द्वारा लंबे समय से सवालों के पते घटनाओं की हत्या. क्षेत्र तेजी से प्रारंभिक phenomenological वर्णन से परे विकसित किया गया है, और मात्रात्मक विश्लेषण कंप्यूटर मॉडलिंग और सिमुलेशन के साथ साथ अब कैसे जाहिरा तौर पर अराजक सेलुलर गतियों और बातचीत के लिम्फ नोड्स के भीतर एक कुशल प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया के लिए नेतृत्व की भावना बनाने की शुरुआत कर रहे हैं. एक हाल ही में एक प्रकाशन, जो 100 immunoimaging के लिए दो photon माइक्रोस्कोपी के आवेदन का वर्णन अधिक पत्र को सूची बद्ध करता है में इस प्रगति को व्यापक समीक्षा की है.
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