此协议,介绍了一种酶水解,利用酶标仪来衡量和分类,土壤磷P单酯,磷酯和无机体育多达96个样品,可以在一次在一个标准的实验室测量高通量的方法。
许多类型的有机磷(P)的分子存在于环境样品1。传统的P的测量并没有发现这些有机磷化合物,因为它们不与 2,3比色试剂反应。酶法水解(EH)是一个新兴的方法,准确定性 4,5环境样品中的有机磷形式。这种方法只莫须有的准确性,磷- 31核磁共振光谱仪(31个P – NMR)的方法,价格昂贵,需要专门的技术training6 。我们已经适应了酶解方法,能够测量三磷类(酯磷和无机磷酯磷,),酶标仪系统 7 。这种方法提供了一种快速,准确,价格合理,用户友好的方式来衡量,在土壤,沉积物,粪肥和,如果集中,水产品样品的P物种的研究人员。这是唯一的高通量方法的测量可以在一个标准的实验室进行的形式和有机磷酶不稳。由此产生的数据提供了洞察科学家研究系统养分含量及富营养化的可能性。
就其性质而言,快速的方法,使用小容量,需要格外小心。因此,最重要的步骤是那些涉及到的板块吹打解决方案。准确,和最重要的,一致的吸管技术的是这个实验的成功至关重要。
的NaOH – EDTA的提取将使大部分在许多样品的p特点分为三类:磷酸盐,P单酯和双酯体育土壤,肥,沉积物或任何其他环境样品中含有氢氧化钠提取的P – EDTA可以特点。环境样品中的P形式不一定是稳定的,这种技术将确保样品的特点,样品前妥协,而无需聘用的研究人员的军队。
这个实验是特别适合时要处理大量的样品。该试剂的需求和空间的要求已经缩减到一个可控的水平(如1.5毫升离心管,而不是50 mL的玻璃烧瓶)。这种适应也限制了废物的产生。
The authors have nothing to disclose.
我们感谢美国地质调查局和佛蒙特水资源湖和研究中心提供资金。
Name of the reagent | Company | Catalogue number |
---|---|---|
NaOH | Sigma-Aldrich | S8045 |
EDTA | Sigma-Aldrich | EDS |
Glacial Acetic Acid | Sigma-Aldrich | 242853 |
Sodium Acetate | Sigma-Aldrich | S2889 |
Wheat Acid Phosphatase | Sigma-Aldrich | P3627 |
Potato Acid Phosphatase | Sigma-Aldrich | P1146 |
Nuclease P1 | Sigma-Aldrich | N8630 |
Potassium Phosphate | Sigma-Aldrich | P2222 |
Sigma-Aldrich | ||
Sigma-Aldrich | ||
Glucose-6 Phosphate | Sigma-Aldrich | G7250 |
SDS | Sigma-Aldrich | L4390 |
Ascorbic Acid | Sigma-Aldrich | A5960 |
TCA | Sigma-Aldrich | T9159 |
Ammonium Molybdate | Sigma-Aldrich | A1343 |
Sodium Citrate | Sigma-Aldrich | S1804 |
Sodium Arsenate | Sigma-Aldrich | S9663 |